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一、课题来源与背景

本课题为甘肃省青年科技基金计划项目（NO.18JR3RA058），项目经费3.0万元。本课题组近年来主要从事肝癌发生发展过程中重要环状RNA的研究，该项目为其中研究内容之一。

二、研究目的与意义

本课题在前期研究的基础上发现circRNA可能在调节肝癌发生发展发挥了重要作用。通过本研究，明确circHIPK3在人肝癌组织中的表达特征，分析人肝癌组织中circHIPK3的表达与肝癌患者病理特征（微血管侵犯、肿瘤大小、肿瘤分期等）及预后的相关性。通过体内外实验明确稳定敲低circHIPK3表达后对肝癌细胞增殖及侵袭转移的调控作用及其机制。明确circHIPK3在调节肝癌发生发展中发挥的重要作用及其机制，有助于开发基于circHIPK3的肝癌诊断生物标志物和治疗靶点。此外，本研究详细分析了目前相关肝癌临床数据，对肝癌的临床治疗现状及现存的临床问题进行了深入探索。

三、主要论点与论据

1、qRT-PCR检测结果表明，circHIPK3在肝癌组织中明显高表达。CircHIPK3在肝癌组织中的表达与肝癌的大小呈正相关，与肝癌微血管侵犯呈负相关。CircHIPK3在人肝癌组织中高表达与肝癌患者无病生存期及总生存期正相关。

2、通过平板克隆实验、CCK-8实验、和EdU实验，表明稳定敲低circHIPK3表达后可显著抑制肝癌细胞的克隆形成和增殖能力。通过裸鼠皮下异种移植瘤实验，发现稳定敲低circHIPK3表达后可显著抑制裸鼠皮下异种移植瘤的生长。

3、通过生物信息学预测、双荧光素酶测定和RNA免疫沉淀测定表明circHIPK3可以与miR-338-3p直接作用。通过生物信息学预测、双荧光素酶测定发现miR-338-3p可以与MDM2直接作用。通过平板克隆实验、CCK-8实验、及Western Blot实验表明，稳定敲低circHIPK3表达后可显著抑制Huh7细胞和SK-Hep-1细胞的克隆形成和增殖能力、抑制miR-338-3p调控的靶基因MDM2的表达、并继发调控p53的表达。miR-338-3p inhibitor能够减弱因稳定敲低circHIPK3表达后对Huh7和SK-Hep-1细胞克隆形成和增殖的抑制作用、以及减弱因稳定敲低circHIPK3表达后对靶基因MDM2表达的抑制作用、并继发调控的p53的表达，从而表明circHIPK3表达下调后可能通过circHIPK3/miR-338-3p/MDM2/p53信号途径抑制了肝癌细胞增殖的机制。

4、通过划痕实验、Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞基质胶侵袭实验表明稳定敲低circHIPK3表达后促进了Huh7细胞和SK-Hep-1细胞的侵袭和迁徙能力。通过活体动物生物发光成像、mirco-CT、及裸鼠双肺转移瘤切片HE染色表明稳定敲低circHIPK3表达后明显增加了裸鼠双肺内转移瘤的发生数量和严重程度。

5、使用qRT-PCR及Western Blot表明稳定敲低circHIPK3表达后促进了miR-558的靶基因HPSE的表达。miR-558 inhibitor可以减弱因稳定敲低circHIPK3表达后对Huh7和SK-Hep-1细胞迁移能力的促进作用、以及减弱因稳定敲低circHIPK3表达后对miR-558靶基因HPSE表达的促进作用，从而表明circHIPK3表达下调后可能通过“海绵”吸附miR-558调节其靶基因HPSE表达这条信号途径促进了肝癌细胞的侵袭转移。

6、此外，本研究完成了靶向药物索拉非尼及免疫药物PD-1对肝癌治疗有效性的预测指标分析。并分析不同治疗模式对肝癌预后的影响。研究实施过程中新发现的CircSETD3、SETD3、KIAA1429、RAPTOR、URB1在肝癌及消化道肿瘤发生与进展中也发挥了重要作用。建立并验证了肝癌预后模型。完成evodiamine抗肝癌作用研究。

四、创见与创新

通过上述研究明确circHIPK3在调节肝癌发生发展中发挥的重要作用及其机制，并有助于开发基于circHIPK3的肝癌诊断生物标志物和治疗靶点。此外，本研究也完成了对肝癌的临床治疗方式及现存的临床问题的深入探索。

五、社会经济效益，存在的问题

肝癌发病率高、早期诊断率低、复发转移率高、五年生存率低。明确circHIPK3在调节肝癌发生发展中发挥的重要作用及其机制，并有助于开发基于circHIPK3的肝癌诊断生物标志物和治疗靶点。CircHIPK3能否对肝癌免疫/炎症微环境具有调控作用及机制需要进一步探索。希望未来能得到更多资金支持进行更深入、更快、更全面的研究。