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一种抑制枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶活性的多肽服务需求
发布时间:
2022-11-07
截止日期:2023-11-07
预算 双方协商
基本信息
地区： 天津市 市辖区 滨海新区
需求方： 天津***技处
行业领域
生物产业
需求描述
1.服务需求背景:
谷氨酰胺转胺酶(transglutaminase，***，简称TG)，是一种催化酰基转移反应的酶，能催化蛋白质分子内、分子间以及蛋白质与氨基酸之间形成ε‑(γ‑Glu)‑Lys异肽键使其共价交联聚合，从而直接改变蛋白质本身以及蛋白质所附着的细胞、组织等的结构与功能，因而该酶在食品工业和医药工业中具有广泛的应用。TG的生产方法有动植物组织提取法和微生物发酵法两种。TG的早期生产采用动物组织提取法，但由于动物组织来源少、提取工艺复杂、回收率低、产品成本过于昂贵的缘故，酶的生产应用一直受到很大限制。微生物来源的TG因其酶活性不依赖Ca2+，且最有希望实现工业生产，引起了广泛关注，目前仅茂源链霉菌来源的TG实现了商业化生产应用在食品加工中。链霉菌属来源的TG具有信号肽和前肽，由于前肽的作用，使得链霉菌来源的TG在细胞内没有活性，而不损害细胞，然后通过信号肽分泌到细胞外，实现TG的生产。
2.服务需求具体内容:
1.氨基酸序列为SEQIDNo:1的多肽在抑制枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶活性中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：应用的方法步骤如下：将所述多肽和凝血因子Xa可识别酶切位点序列连接，形成polypeptide‑I‑E‑G‑R，枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶基因再定向克隆到polypeptide‑I‑E‑G‑R的下游，形成polypeptide‑I‑E‑G‑R‑BTG片段；该多肽以融合蛋白的形式抑制BTG的活性，经凝血因子Xa酶切后去除此多肽，恢复枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶活性。
3.抑制枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶活性的多肽，其特征在于：所述多肽为将SEQIDNo:1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且抑制枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶活性的多肽。
3.具体的服务需求完成后所要达到的标准或效果:
(1)本发明抑制枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶活性的多肽通过融合蛋白的形式抑制BTG的活性，抑制率可达到60%以上，可使细胞毒性较强的BTG先以活性受抑制的形式在宿主细胞中表达，然后在凝血因子Xa(FactorXa)的作用下，去除抑制物，又使其活性得到恢复
(2)本发明多肽由于可特异性抑制BTG的活性，而且可随时去除，解除抑制效应，可以应用于抑制枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶活性中，以及应用于制备枯草芽孢杆菌来源的谷氨酰胺转胺酶中
(3)本发明多肽的筛选方法如链霉菌来源的TG，在BTG的N端加上一段多肽，先通过多肽来抑制BTG的活性，使其低活性表达，继而通过蛋白酶的切割，去除多肽，解除对BTG的抑制，充分发挥其生物活性，从而减轻其对宿主细胞的毒性作用，为其能够实现在宿主细胞中的高效表达奠定基础
4.发明人
路福平;刘逸寒;蔺松;王春霞;王建玲
联系人：宋巍；刘胜斌
联系电话：022-60600153；022-60600161
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