行业领域

生物与新医药技术

需求描述

1.服务需求背景:

二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid,DHA)是一种多不饱和脂肪酸，DHA碳链结构含有六个双键，具有高度的不饱和性。DHA在人体自身难以合成，需由食物提供，是人体必需脂肪酸之一。DHA与人体的生理功能密切相关，可维持大脑、视网膜等的正常功能和生长发育，具有抑制血小板凝聚、抗血栓、调血脂、提高免疫力、健脑益智等功效，对抑制炎症和部分癌症、糖尿病的发生也有较好的功效。

磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)是一种天然的磷脂，PS的结构决定了其具有双亲性的独特性质，带有负电荷的一端具有亲水性(或水溶性)，由脂肪酸组成的另一端具有亲脂性(或脂溶性)。PS能够提高脑细胞活力，对预防老年痴呆症、治疗脑萎缩、改善老年人的大脑功能有很好的疗效，此外对减少压力激素的分泌、促进脑疲劳的恢复、平衡情绪、缓解抑郁症也有一定的疗效。PS还可以改善青少年学生的记忆力、增加学习时的集中力、有效提高学习成绩、治疗儿童多动症。

2.服务需求具体内容:

1.一种2-DHA-PS的制备方法，其特征在于，所述方法包括：丝氨酸与磷脂酰胆碱在高活力磷脂酶D的催化下生成磷脂酰丝氨酸，磷脂酰丝氨酸与DHA在高活力磷脂酶A2的催化下生成2-DHA-PS；所述高活力磷脂酶A2含有如SEQIDNO：10所示的氨基酸序列，是氨基酸序列如SEQIDNO：9所示的野生型磷脂酶A2通过定点突变得到的突变体；所述高活力磷脂酶D来源于专利CN102286440B。

2.如权利要求1所述的2-DHA-PS的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)将所述高活力磷脂酶D加入***的含有丝氨酸、CaCl2的醋酸-醋酸钠缓冲液中，与含有磷脂酰胆碱的乙醚等体积混合均匀，在30-50℃下反应6-16小时；其中，反应之前高活力磷脂酶D浓度为***、丝氨酸的浓度为***、CaCl2的浓度为***；(2)反应结束后静置分层，提取含磷酯酰丝氨酸的有机相；(3)在步骤(2)得到的含磷酯酰丝氨酸的有机相中加入二十二碳六烯酸，然后与***的含有高活力磷脂酶A2、CaCl2的磷酸盐缓冲液等体积混合均匀，在30-50℃下反应6-16小时；其中，反应之前磷脂酶A2浓度为10-40U/mL、CaCl2的浓度为***；(4)反应结束后静置分层，提取有机相并加入4-6倍体积的丙酮将生成的2-DHA-PS沉淀下来，然后离心分离，收集沉淀并用丙酮洗涤2-4次，即可得到2-DHA-PS产品。

3.如权利要求2所述的2-DHA-PS的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述磷脂酰胆碱的浓度为***。

4.如权利要求2所述的2-DHA-PS的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述二十二碳六烯酸的浓度为***。

5.如权利要求1-4任一一项所述的2-DHA-PS的制备方法，其特征在于，以氨基酸序列如SEQIDNO：9所示的野生型磷脂酶A2代替所述高活力磷脂酶A2。

3.具体的服务需求完成后所要达到的标准或效果:

(1)本发明使用重叠PCR技术，对野生型磷脂酶A2进行定点突变，获得的高活力磷脂酶A2的比酶活比野生型提高***％，提高了磷脂酶A2的应用性能

(2)本发明提供了一种高效催化制备2-DHA-PS的方法，2-DHA-PS经过磷脂酶A2和磷脂酶D两步催化反应制备而得，克服了现有合成方法产量低、选择性不高、无法获取高纯度2-DHA-PS的问题，通过本发明的方法可制备高纯度的2-DHA-PS，在医药、食品及保健品领域具有很大的应用潜力

4.发明人

路福平;刘逸寒;张涛;刘晓光;王正祥;王春霞;王建玲

联系人：宋巍；刘胜斌

联系电话：022-60600153；022-60600161