行业领域

生物与新医药技术

需求描述

1.服务需求背景:

磷脂酶A2广泛存在于自然界，几乎所有的生物细胞及亚细胞中都有这种酶。存在于细胞内的磷脂酶A2，浓度、酶活较低，但参与许多重要的生理代谢过程；存在于细胞外的磷脂酶A2，含量高、活力强、易于富集纯化，是工业商品磷脂酶A2的主要来源。

磷脂酶A2在多个领域具有应用价值，1、用于溶血磷脂的制备：溶血磷脂在食品加工中可作为乳化分散剂、乳化剂使用，溶血磷脂添加在护肤化妆品中，能起到舒展皮肤皱纹，改善粗糙结构的作用。2、用于油脂精炼：磷脂酶A2可以将油脂中的磷脂转化成易于溶解在水中的溶血磷脂，然后经过离心即可除去油脂中的磷脂，以达到脱胶的目的。3、用于功能性磷脂的制备：由于某些磷脂酶A2具有催化磷脂sn-2位磷酸二脂酯键碱基交换的功能，可以将不饱和脂肪酸(如二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸)整合在磷脂骨架中，从而提高磷脂的生理功能。

2.服务需求具体内容:

1.一种磷脂酶A2突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO：8所示。

2.权利要求1所述的磷脂酶A2突变体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)通过重叠PCR定点突变野生型磷脂酶A2基因，得到磷脂酶A2突变体编码基因；(2)将所述的磷脂酶A2突变体编码基因酶切、连接到表达或展示载体，得到携带磷脂酶A2突变体编码基因重组载体；(3)将重组载体转化至宿主细胞，得到重组菌株；(4)表达所述的重组菌株，纯化获得如SEQIDNO：8所示的磷脂酶A2突变体。

3.根据权利要求2所述的磷脂酶A2突变体的制备方法，其特征在于，所述野生型磷脂酶A2基因来自天蓝色链霉菌(Streptomycescoelicolor)ATCC23899,其核苷酸序列如序列表SEQIDNO：9所示。

4.权利要求1或2所述的磷脂酶A2突变体的编码基因如序列表SEQIDNO：10所示。

5.一种包含权利要求4所述的基因的克隆载体、表达载体、以及宿主细胞。

6.根据权利要求5所述的克隆载体、表达载体或宿主细胞，其特征在于，所述的克隆载体为T载体、所述的表达载体为pBSA43、所述的宿主细胞为枯草芽孢杆菌WB600。

7.权利要求5所述的克隆载体、表达载体或宿主细胞，其特征在于，所述的克隆载体为T载体、所述的表达载体为pPIC9K、所述的宿主细胞为毕赤酵母GS115。

8.一种包含权利要求4所述的基因的克隆载体、展示载体、以及宿主细胞，其特征在于，所述的克隆载体为T载体、所述的展示载体为pPIC9K-Flo、所述的宿主细胞为毕赤酵母GS115。

3.具体的服务需求完成后所要达到的标准或效果:

(1)本发明使用重叠PCR技术，对野生型磷脂酶A2进行定点突变(Glu37Ala、Asp78His)，得到高活力磷脂酶A2。在37℃条件下，高活力磷脂酶A2的比酶活比野生型磷脂酶A2的比酶活提高了***％

(2)本发明中枯草芽孢杆菌高活力磷脂酶A2重组菌发酵后磷脂酶A2的酶活可达到***，毕赤酵母游离表达高活力磷脂酶A2重组菌的酶活可达***，毕赤酵母细胞表面展示高活力磷脂酶A2全细胞催化剂的酶活可达260U/(g·干细胞)

(3)本发明采用酵母展示系统，将磷脂酶A2展示于酵母表面，酵母细胞既作为酶的生产者，又可以充当固定化酶中的载体，免去了酶的纯化和固定等操作，简化了生产环节，降低了生产成本

4.发明人

路福平;刘逸寒;张涛;刘晓光;王正祥;王春霞;王建玲

联系人：宋巍；刘胜斌

联系电话：022-60600153；022-60600161