行业领域

生物产业

需求描述

1.服务需求背景:

噬菌体(Bacteriophage或phage)是自然界存在数量最多的生物，约有1031个噬菌体。噬菌体是感染细菌等微生物的病毒，能够特异地裂解宿主菌，同时与宿主菌是否耐药无关。噬菌体不感染人类、动物、植物以及其它非宿主的细菌，几乎对环境不产生压力。另一方面，某些噬菌体能够编码一种酶，可以降解宿主菌的胞外多糖聚合物(EPS)，从而破坏致病菌形成的生物被膜。这些特性使噬菌体可以用来控制致病菌的感染。

虽然噬菌体广泛存在于自然界的各种环境中，但是噬菌体的分布存在不确定性。很多情况下，采用常规方法，很难分离到噬菌体，这种情况出现在多种致病菌噬菌体的分离。本发明涉及的方法，采用从特定环境分离致病菌，并以该致病菌为宿主菌，从相同样品中，直接分离特异性的噬菌体，解决了噬菌体的来源于特异性问题，分离到的噬菌体可直接用于水产品细菌性疾病的防控。

2.服务需求具体内容:

1.一株能够裂解维氏气单胞菌的噬菌体，其特征在于：噬菌体名称为ΦA8-29，分类名称为Aeromonasveroniiphage，保藏编号：***；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年04月25日。

2.权利要求1所述的噬菌体裂解的维氏气单胞菌，名称为A8-29，分类名称为Aeromonasveronii，保藏编号：***，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年04月25日。

3.一种裂解水产致病菌噬菌体的分离与筛选方法，其特征在于：步骤如下：⑴水产致病菌的分离收集各种水产品样品，将样品匀浆，稀释匀浆液，取稀释液100μl在选择性培养基上涂板，选择性培养基包括SS培养基、TCBS培养基和麦康凯培养基，37℃倒置培养24-48h，挑取菌落，在同样的选择培养基上划线纯化菌株，反复纯化三次，将形态一致的菌株用灭菌的牙签挑取单菌落，接入LB液体培养基中，37℃振荡培养12h，取对数期菌液与甘油溶液混和后置于-80℃冰箱保藏；⑵噬菌体的分离将所有养殖种类的肠道内容物各1g置于50mlTSB-YE培养基中，37℃震荡培养72h，将培养物加入50ml离心管，加1ml氯仿轻轻混匀几次，10000×g离心5min，取上清液置于4℃储存，该上清液作为分离噬菌体的来源；⑶培养上述分离的水产致病菌至对数生长期，与上述制备的上清液混和，再与***％琼脂培养基混匀倒双层平板，37℃培养4-8h，观察噬菌斑的出现，挑取单个噬菌斑，置于LB液体培养基中重悬，制备噬菌体溶液，稀释噬菌体溶液，与对数期的指示菌混匀，再与***％琼脂培养基混匀到双层平板，37℃培养4h后观察噬菌斑，重复此步骤纯化噬菌体，⑷宿主菌基因组DNA的制备将宿主菌接种于LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜后，菌液离心弃上清，沉淀中加入TE缓冲液重悬菌体，加溶菌酶室温放置10min，加入SDS和蛋白酶K混匀后，60℃水浴保温6h，加入等体积的苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，振荡混匀，离心取上清液于新的离心管中，抽提至没有蛋白膜为止；向上清液中加入氯仿抽提，取上清液于新的离心管中，向上清液中加入2倍体积的95％乙醇(预冷)，振荡混匀，离心弃掉上清液；沉淀中加入70％乙醇，10000rpm离心5min，弃掉上清，室温下干燥；加入双蒸水或TE缓冲液(***)，获得宿主菌染色体DNA溶液，用***％琼脂糖凝胶电泳检测务

3.需求完成后所要达到的标准或效果:

(1)本申请分离的噬菌体用于研制针对重要水产致病菌的噬菌体制剂，控制由致病菌引起的水产品的细菌性感染，避免或减少抗菌素在水产养殖过程中的使用，减少多重耐药性细菌的富集，对食品安全具有重要意义。

(2)本发明提供的方法可以高效快速地筛选针对不同致病菌的噬菌体，能够避免或减少抗菌素在水产养殖中的使用，对于发展水产养殖的绿色模式，对于食品安全，都具有重要价值。

(3)本发明筛选的噬菌体命名ΦA8-29，分类名称为Aeromonasveroniiphage，保藏编号：***；效价测定为***×1010pfu/ml，分离得到的烈性噬菌体能够用于预防和控制水产致病菌的感染，避免或减少抗菌素在水产养殖中的使用，发展水产养殖的绿色模式。

4.发明人

杨洪江;何洋

联系人：宋巍；刘胜斌

联系电话：022-60600153；022-60600161