科创中国
一种牙鲆肠道上皮细胞系及其构建方法和应用
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2026-04-01 10:10:53
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：成果发布人| 徐景新 | 2026-04-01 10:10:54
本发明公开了一种牙鲆肠道上皮细胞系及其构建方法和应用，涉及海洋生物细胞培养领域。该构建方法包括以下步骤：(1)取牙鲆的肠道，去除所述肠道上的脂肪和腹膜后，得到肠壁组织，之后置于装有完全培养液的培养容器中进行贴壁培养；(2)步骤(1)贴壁培养获得的细胞，消化后进行传代培养，传代培养50代，得到所述牙鲆肠道上皮细胞系。利用本发明的构建方法可以成功构建得到牙鲆肠道上皮细胞系，该细胞系的主要特点是：细胞系可以连续传代50代或以上，生长速度快，传代频率高，能提供大量的牙鲆肠道上皮细胞；细胞的生长状态良好，能稳定增殖，细胞系的主要细胞类型为铺路石样细胞。
该细胞系的构建核心在于“组织取材优化-培养基适配-传代方法创新”三维协同。选取牙鲆幼鱼中段肠道组织，采用胶原酶与胰蛋白酶序贯消化法获得单细胞悬液，通过差速贴壁与有限稀释法纯化上皮细胞。培养基经优化添加胎牛血清、表皮生长因子、胰岛素及多种氨基酸，维持细胞增殖与分化平衡。传代时采用胰蛋白酶-EDTA与机械吹打相结合的方式，避免细胞损伤。经鉴定，细胞系角蛋白免疫组化阳性，碱性磷酸酶活性高，具备典型上皮细胞功能。染色体分析显示为正常二倍体核型，遗传稳定性良好。
该牙鲆肠道上皮细胞系可广泛应用于鱼类病毒分离培养、致病机制研究、疫苗效力评价及药物安全性筛选等领域。特别适用于海水鱼类病毒性疾病（如淋巴囊肿病、神经坏死病）的病原学诊断与防控技术研发。随着牙鲆养殖集约化发展及病害防控对细胞培养技术的需求增长，该细胞系可作为标准化的体外模型，用于新型抗病毒药物筛选、益生菌功能评价及环境污染物毒性测试。该细胞系还可拓展至其他海水鱼类肠道细胞系的建立方法借鉴，具备良好的技术延伸性。
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本成果产生的效益显著。科研效益上，为海水鱼类病毒学研究提供了稳定、均一的体外模型，解决了原代细胞批次差异大、传代次数有限的瓶颈问题，加速了病毒分离鉴定与疫苗研发进程。产业效益上，细胞系可应用于养殖企业病害诊断服务，提高病原检测的准确性与效率；用于疫苗生产过程中的病毒滴度测定，保障疫苗质量稳定性。经济效益上，细胞系的建立减少了实验动物的使用量，降低了研发成本，为相关生物制品企业创造了经济价值。技术效益上，为其他海水鱼类细胞系的建立提供了可借鉴的技术体系。产业层面，增强了我国在水产动物细胞资源库建设与利用领域的自主创新能力。
技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接此项目。
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