本发明公开了一种鹦鹉喙羽病病毒PCR诊断试剂盒及其检测方法，包括：裂解液、扩增反应混合液、阴性对照和阳性对照；其中，裂解液的成分为DNAiso Reagent；扩增反应混合液包含灭菌三蒸水、PCR Buffer、dNTP、PBFDV‑F上游引物、PBFDV‑R下游引物和rTaq DNA聚合酶；阴性对照为灭菌三蒸水；阳性对照为PBFDV阳性质粒。该试剂盒针对鹦鹉喙羽症病毒设计了一对特异性引物，试剂盒的灵敏度高、特异性好、稳定性高、结果直观，其检测方法易于操作、方便快捷，能大幅缩短检测时间，降低诊断费用，为临床控制鹦鹉喙羽病病毒感染提供有力的技术手段，适用于鹦鹉喙羽症病毒病的快速诊断。

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种鹦鹉喙羽病病毒PCR诊 断试剂盒及其检测方法，该试剂盒针对鹦鹉喙羽症病毒设计了一对特异性引物，试剂盒的 灵敏度高、特异性好、稳定性高、结果直观，其检测方法易于操作、方便快捷，能大幅缩短检 测时间，降低诊断费用，为临床控制鹦鹉喙羽病病毒感染提供有力的技术手段，适用于鹦鹉 喙羽症病毒病的快速诊断。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现。(一)一种鹦鹉喙羽病病毒PCR诊断试剂盒，包括：裂解液、扩增反应混合液、阴性对 照和阳性对照；其中，所述裂解液的成分为DNAiso Reagent；所述扩增反应混合液包含灭菌 三蒸水、PCR Buffer、dNTP、PBFDV-F上游引物、PBFDV-R下游引物和rTaq DNA聚合酶；所述阴 性对照为灭菌三蒸水；所述阳性对照为PBFDV阳性质粒。优选的，所述PBDFV-F上游引物的序列为：5’-AGCGATTTGGATAATGAGAAGTA-3’；所述 PBDFV-R下游引物的序列为：5’-CCCGGGGGGCCGTACACAACGT-3’。

鹦鹉喙羽症的病原为鹦鹉喙羽病病毒(PBFDV)，主要引起鹦鹉鸟喙及羽毛病变，是 一种高传染性病，发病急，死亡迅速。此疾病首先发现在1970年代中期的南太平洋鹦鹉，症 状为羽毛不规则生长及脱落，鸟喙变形，最后因免疫力降低引发感染而死亡。后来又陆续在 葵花鹦鹉、非洲灰鹦鹉、折衷鹦鹉、爱情鹦鹉、虎皮鹦鹉、亚马逊鹦鹉、金刚鹦鹉及小鹦哥发 现PBFDV感染。

PBFDV属于圆环病毒科、圆环病毒属成员，为20面体对称病毒，基因组为环状单股 DNA。PBFDV传播的途径主要是通过患鸟的血液、羽屑、粪便、嗉囊分泌物散播病毒，其中又以 羽屑为最重要的散布来源，幼鸟免疫系统发育不成熟，所以容易受到感染。目前对PBFDV的 诊断研究几乎是空白，本发明针对PBFDV基因设计了PCR诊断方法，并组装成试剂盒，是鹦鹉 PBFDV感染最灵敏特异的诊断技术手段。

咸阳职业技术学院创始于1937年，2004年经陕西省人民政府批准，教育部备案，由原陕西省乾县师范学校、彬县师范学校、仪祉农业学校和咸阳市体育运动学校、卫生学校、技工学校等6所学校合并而成，是咸阳市人民政府直属的唯一一所全日制公办普通高等学校。学院为省级示范高职院校、省级“双高计划”建设单位、全国文明单位、全国绿化模范单位、国家节约型公共机构示范单位和中国特色“双高计划”高水平专业群建设单位。全日制在校学生20000多名。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明所得的鹦鹉喙羽病病毒PCR诊断试剂盒可在短时间内确诊鹦鹉是否感染鹦 鹉喙羽病病毒，检测时间控制在2小时左右，该试剂盒的特异性好，能特异性诊断出鹦鹉喙 羽病病毒；灵敏度高，检测极限可达1.95×10-7
pg·μL-1
；稳定性高，试剂盒在在6个月内检 测结果一致；田间试验证明试剂盒的实用性和适用性良好。其检测方法易于操作、方便快 捷，能达到快速检测的目的。

技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，希望具备此项技术研发的技术方，能够承接此项目。