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与I群禽腺病毒免疫相关融合蛋白及其编码基因与应用

成果类型:: 发明专利

发布时间: 2024-04-26 10:43:53

科技成果产业化落地方案
方案提交机构:成果发布人| 涂媛 | 2024-04-26 10:43:53

I群禽腺病毒Hexon-Linker-ChIL2真核表达融合蛋白,包括I群禽腺病毒的主要抗原蛋白Hexon基因和细胞因子类免疫增强剂--鸡白细胞介素-2(chIL-2)基因串联起来的DNA分子,将其通过表达载体注射到鸡的肌肉中,可以产生Hexon特异抗体,具有良好的免疫保护效果,并且进行I群禽腺病毒攻毒实验表明,可以使有效地预防I群禽腺病毒。

利用柔性linker将I群禽腺病毒的主要抗原蛋白Hexon和细胞因子类免疫增强剂--ChIL2两个基因进行串联,构建pcDNA3.1- Hexon-Linker-ChIL2融合基因重组真核表达载体,Linker部位具有折叠性好、亲水性低、无抗原性、无新表位出现等优点,保证了所表达的2个分子均可保持各自原来的空间构象和生物活性,对融合蛋白的立体构象影响较小。I群禽腺病毒Hexon-Linker-ChIL2真核表达融合蛋白,免疫鸡后可以产生Hexon特异抗体,具有良好的免疫保护效果,并且进行I群禽腺病毒攻毒实验标明,可以使有效地预防I群禽腺病毒。

I群禽腺病毒(fowl adenovirus group I,FAVI)包括从鸡、火鸡、鹅和其他禽类分离的共12个血清型的病毒,其中比较著名的病毒株有鸡胚致死孤儿病毒、鹌鹑支气管炎病毒、鸡包涵体肝炎病毒。近年来,I群禽腺病毒引起了鸡只包涵体肝炎、心包积液肝炎综合征和砂囊糜烂等疾病,虽然I群禽腺病毒常呈阴性感染,但是它与其他病原共同作用于家禽,给养禽业带来较大威胁。

相对于传统疫苗,基因工程疫苗的生产完全在体外进行,无需以易感动物为载体来获得病毒制备活疫苗或者灭活苗;同时,基因工程疫苗不含能引起鸡群发病的成分,因而没有散毒的危险。其中,DNA疫苗是将含有编码抗原基因的质粒DNA直接导入体内,使抗原基因在体内表达,诱导机体产生免疫应答,包括中和抗体、淋巴细胞和辅助T细胞。通过此种疫苗表达的蛋白能够以天然抗原形式被免疫系统识别,热稳定性好、免疫力持久。

鸡白细胞介素2(ChIL-2)是辅助T细胞分泌的淋巴因子,在免疫系统中发挥重要作用,可促进T细胞、NK细胞、B细胞的分化成熟及激活其生物活性,诱导淋巴因子激活杀伤细胞活性,促进干扰素、肿瘤坏死因子等的合成与释放以及抗体生成,可大大增强机体免疫功能,因此ChIL-2作为DNA疫苗佐剂已经被国内外广泛使用。

谢芝勋(1963.1一),男,广西博白人。1983年毕业于广西农学院畜牧兽医系兽医专业。二级研究员,硕士研究生导师,现任广西壮族自治区兽医研究所副所长,国家“万人计划”领军人才、“新世纪百千万人才工程”国家级人选、享受国务院特殊津贴专家、广西特聘专家和广西优秀专家。主要从事动物传染病综合防控技术的研究,开展了一系列高水平科研项目的研究工作,先后主持了国家自然科学基金、国家科技成果转化项目、科技部、农业部、广西科技攻关重大专项和广西自然科学基金重点项目等30多个项目的研究,在动物传染病(包括禽病、猪病、牛病、虾病和贝类疾病等)防控技术的研发上取得一批具有国内领先和国际先进水平的科研成果,解决养殖业发展一系列技术关键问题,促进了行业技术进步,产生了显著经济效益和社会效益。

本发明的实验证明,由于Hexon基因蛋白是I群禽腺病毒的主要表面抗原蛋白,含有中和性抗原表位,能诱导中和抗体的产生,而鸡白细胞介素2(ChIL-2)作为佐剂可以增强抗原的免疫原性和反应原性,因此本发明提供了一种包括I群禽腺病毒的Hexon基因和鸡白细胞介素-2(chIL-2)基因串联起来的DNA分子,将其克隆进表达载体后注射到鸡的肌肉中,可以产生Hexon特异抗体,具有良好的免疫保护效果,并且进行I群禽腺病毒攻毒实验后,可以有效地控制I群禽腺病毒,使鸡不排毒,说明该DNA分子及由其构建的重组载体能够有效地预防I群禽腺病毒,且具有安全性高、在体内维持时间长、制备简单、热稳定性良好、便于储藏和运输等优点。

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