牡蛎折光马尔太虫LAMP检测试剂盒,采用环介导等温扩增(LAMP)技术,并根据折光马尔太虫共有的基因保守区设计了两个特异性内引物、两个特异性外引物和两个特异性环引物。仅需通过对组织样品进行DNA提取并进行环介导等温扩增,即可检测出牡蛎折光马尔太虫,解决了现有技术检测时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷,具有特异性强、敏感性高、快速且成本低、操作方法更简单,特别适于基层现场快速检测牡蛎折光马尔太虫的需要。

只需要在62℃的水浴锅中反应60分钟即可完成，可通过肉眼观察颜色直接判定结果，适合在基层兽医站和养殖场中进行快速检测。能特异的检测折光马尔太虫，并且检测的灵敏度非常高，能检测到20fg的DNA样品，灵敏度是常规PCR的100倍。

折光马尔太虫(Marteilia refringens)对牡蛎养殖的危害较大，可引起贝类消瘦、消化道变色、停止生长并死亡，大洋洲和欧洲等国家其感染现象普遍存在。

折光马尔太虫的传统检测方法有电镜观察、组织细胞学检查、原位杂交等，这些方法费时费力，缺乏专一性，在实际工作中具有一定的局限性。目前，虽已建立起折光马尔太虫PCR检测方法和荧光定量PCR检测方法，其检测敏感性也比较高，但是常规PCR需要使用PCR仪和进行凝胶电泳，荧光定量PCR则需要使用更加昂贵的荧光定量PCR仪和试剂等，，因而难以适应基层现场检测需要。

谢芝勋(1963.1一)，男，广西博白人。1983年毕业于广西农学院畜牧兽医系兽医专业。二级研究员，硕士研究生导师，现任广西壮族自治区兽医研究所副所长，国家“万人计划”领军人才、“新世纪百千万人才工程”国家级人选、享受国务院特殊津贴专家、广西特聘专家和广西优秀专家。主要从事动物传染病综合防控技术的研究，开展了一系列高水平科研项目的研究工作，先后主持了国家自然科学基金、国家科技成果转化项目、科技部、农业部、广西科技攻关重大专项和广西自然科学基金重点项目等30多个项目的研究，在动物传染病(包括禽病、猪病、牛病、虾病和贝类疾病等)防控技术的研发上取得一批具有国内领先和国际先进水平的科研成果，解决养殖业发展一系列技术关键问题，促进了行业技术进步，产生了显著经济效益和社会效益。

本发明采用环介导等温扩增(LAMP)技术，并根据折光马尔太虫共有的基因保守区(见序列表#.No.1)设计了两个特异性内引物、两个特异性外引物和两个特异性环引物，由此发明了用于快速检测牡蛎折光马尔太虫的牡蛎折光马尔太虫LAMP检测试剂盒。应用本发明的LAMP检测试剂盒建立牡蛎折光马尔太虫检测方法，仅需通过对组织样品进行DNA提取并进行环介导等温扩增，即可检测出牡蛎折光马尔太虫。该法无需昂贵的PCR仪只需普通水浴锅，却比PCR检测有更高的灵敏度，且不必通过凝胶电泳观察结果，操作简单而快速，特别适用于基层现场检测。

另外，常规的LAMP方法，需要在反应结束后开盖加入SYBR Green I或Gene Finder染料来显色，容易造成假阳性：一方面，反应产物易形成气溶胶而污染周围环境造成假阳性；另一方面，SYBR Green I或Gene Finder染料还会由于引物二聚体而引起假阳性。因此，本发明使用内加钙黄绿素+氯化锰替代了外加的SYBR Green I和Gene Finder染料，即在配置LAMP反应液时就加入反应液中而无需LAMP反应后再开盖加入；而且，钙黄绿素+氯化锰仅在发生LAMP反应时才出现绿色，避免了SYBR Green I和Gene Finder染料带来的假阳性问题，所以具有更好的特异性。

技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接此项目。。