本发明公开了一种用于鉴别牛病毒腹泻病毒和牛轮状病毒的引物组合及其应用.本发明提供的引物组合由序列表的序列18所示的单链DNA分子组成,在序列3牛病毒性腹泻引物组所示的单链DNA分子的5'端连接有荧光基团A,在牛轮状病毒引物组序列7所示的单链DNA分子的5'端连接有荧光基团B.

本发明首次在LAMP方法中引入了荧光基团,建立了鉴定BVDV和BRV的二重荧光RTLAMP方法,通过扩增产物颜色观察可同时鉴别诊断两种病毒.本发明建立的二重RTLAMP方法特异性好,能高效扩增目的基因,而对其它病原核酸无扩增,敏感性好,最低能检测到100个混合模板拷贝/反应,是一种简便,快速,低成本的诊断方法,适用于大规模的流行病学调查.

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea disease virus，BVDV)和牛轮状病毒(Bovine Rotavirus，BRV)是两种常见牛腹泻病毒，症状相似，难以区分。BVDV临床上常出现发热、腹泻、黏膜损伤和趾部损伤，但大多数感染BVDV的牛以持续性感染不表现临床症状存在，持续感染的牛一旦再次接触抗原相似性抗原便会继发为黏膜病，死亡率100％。持续性感染的牛可通过血液、排泄物等多种途径水平传播病毒，还可通过生殖道垂直传播，它们终身带毒，持续排毒，成为重要传染源，是养牛业潜在的危害。牛轮状病毒感染1-7日龄的犊牛，可引起犊牛消化道机能紊乱，临床上以呕吐、腹泻、脱水和酸碱平衡为特征。两种病毒感染后都会引起严重的经济损失，因此急需建立牛病毒性腹泻和牛轮状病毒的快速检测技术，为我国BVDV和BRV的防控提供技术支持。

目前常用的BVDV和BRV的诊断方法主要有：病原分离，血清学方法和分子生物学方法(RT-PCR和荧光RT-PCR)。环介导的体外等温扩增检测技术(Loop-mediatedisothermal amplification，LAMP)在PCR方法上发展起来的新兴核酸检测技术，突破了恒温扩增的技术难点，6条引物同效率时增，敏感性高，特异性好，已在多种疾病的检测上得到应用。多重LAMP是一种高效的LAMP形式，一次LAMP反应，可同时检测、鉴别多种病原体。但目前国内的多重LAMP方法都有一定的局限性，不能确定具体到底是哪一种病原引起的阳性结果，不能实现真正意义上的鉴别诊断。

谢芝勋(1963.1一)，男，广西博白人。1983年毕业于广西农学院畜牧兽医系兽医专业。二级研究员，硕士研究生导师，现任广西壮族自治区兽医研究所副所长，国家“万人计划”领军人才、“新世纪百千万人才工程”国家级人选、享受国务院特殊津贴专家、广西特聘专家和广西优秀专家。主要从事动物传染病综合防控技术的研究，开展了一系列高水平科研项目的研究工作，先后主持了国家自然科学基金、国家科技成果转化项目、科技部、农业部、广西科技攻关重大专项和广西自然科学基金重点项目等30多个项目的研究，在动物传染病(包括禽病、猪病、牛病、虾病和贝类疾病等)防控技术的研发上取得一批具有国内领先和国际先进水平的科研成果，解决养殖业发展一系列技术关键问题，促进了行业技术进步，产生了显著经济效益和社会效益。

本发明首次在LAMP方法中引入了荧光基团，建立了鉴定BVDV和BRV的二重荧光RT-LAMP方法，通过扩增产物颜色观察可同时鉴别诊断两种病毒。本发明建立的二重RT-LAMP方法特异性好，能高效扩增目的基因，而对其它病原核酸无扩增，敏感性好，最低能检测到100个混合模板拷贝/反应，是一种简便，快速，低成本的诊断方法，适用于大规模的流行病学调查。

技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接此项目。。