本发明是一种用于鉴定牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用。本发明包括牛支原体引物组和牛传染性鼻气管炎引物组两套引物组合，反应体系，反应条件以及结果判读。采用两套引物组,通过二重二温式PCR检测牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒,具有特异性好、灵敏度高、普适性好、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查。本发明为牛病的防控提供了新的技术方法,具有很高的临床应用价值。

在一个反应管内采用两套引物组共同反应，实现对两个病原的鉴别诊断,通过二重二温式PCR检测牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒,具有特异性好、灵敏度高、普适性好、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查。本发明为牛病的防控提供了新的技术方法,具有很高的临床应用价值。

牛支原体(Mycoplasma bovis，MB)主要引起牛呼吸困难、气喘、咳嗽，同时还可引起关节炎、乳房炎、生殖道炎、角膜结膜炎、耳炎等。谢建华等人在2008-2013年间对重庆地区1606份牛血清样品进行检测，结果显示MB阳性率为49.00％。郭澍强等人对宁夏16个规模化养殖场的460份牛血清进行了牛支原体抗体的检测,结果显示MB阳性率为32.17％。

牛传染性鼻气管炎病毒(bovine herpesvirusⅠ，IBRV)又称为传染性牛鼻气管炎病毒，主要引起牛高热、鼻炎、呼吸困难和母畜流产等疾病。该病影响牛群的繁殖和产奶，给养牛业造成了巨大的经济损失，我国将其列为二类动物疫病。韩照清等人在2011年间采自西藏(988份)、青海(475份)和四川(377份)共1840份牦牛血清样品进行牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测，结果IBRV阳性率分别为38.6％、44.6％、27.9％。孙庆宇等人(2014年)在内蒙古地区16个奶牛养殖场的2321头奶牛进行牛传染性鼻气炎血清流行病学调查，结果显示IBRV平均阳性率为75.7％。张弦等人(2015年)对上海地区19个规模化牧场共920份血清样品进行IBRV血清抗体检测,结果表明IBRV抗体阳性率为46.74％。李永琴等(2016年)对宁夏地区18个规模化奶牛场470份血清进行牛传染性鼻气管炎的血清学调查，结果显示平均阳性率达到71.9％。

牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒均能引起牛呼吸道疾病，临床症状态相似难以区分，因此急需建立牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的快速检测技术，为牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的防控提供技术支持。

谢芝勋(1963.1一)，男，广西博白人。1983年毕业于广西农学院畜牧兽医系兽医专业。二级研究员，硕士研究生导师，现任广西壮族自治区兽医研究所副所长，国家“万人计划”领军人才、“新世纪百千万人才工程”国家级人选、享受国务院特殊津贴专家、广西特聘专家和广西优秀专家。主要从事动物传染病综合防控技术的研究，开展了一系列高水平科研项目的研究工作，先后主持了国家自然科学基金、国家科技成果转化项目、科技部、农业部、广西科技攻关重大专项和广西自然科学基金重点项目等30多个项目的研究，在动物传染病(包括禽病、猪病、牛病、虾病和贝类疾病等)防控技术的研发上取得一批具有国内领先和国际先进水平的科研成果，解决养殖业发展一系列技术关键问题，促进了行业技术进步，产生了显著经济效益和社会效益。

多重PCR是一种高效的PCR，可在同一个PCR反应管内，同时鉴别检测多种病原体，在多种病原混合感染的鉴别诊断上具有很高的优势和临床实用价值。二温式PCR是在常规PCR基础上发展而成的更简便的PCR检测技术，二温式PCR将退火和延伸在同一温度下完成，退化温度比常规三温式PCR的高，因此不仅提高了PCR的特异性，且二温式PCR省略了反复升温降温的时间消耗，节省时间，提高疾病的诊断效率。本发明提供的方法，全程只需一次抽提、一次PCR、一次电泳即可检测两种病原，非常适合混合感染的样品，省时省力。

近几年养牛饲业规模的不断扩大，疫病防治工作正面临着前所未有的压力，需要简便、快速、高通量检测技术以保证养牛业的健康发展。本发明提供了用于鉴定牛支原体(MB)的引物对甲和用于鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的引物对乙，并基于两个引物对开发了二重二温式PCR方法。采用引物对甲和引物对乙，通过二重二温式PCR检测牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒，具有特异性好、灵敏度高、普适性好、方便快速等优点，可用于临床鉴别诊断和流行病学调查。本发明为牛病的防控提供了新的技术方法，具有很高的临床应用价值。

技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接此项目。。