本发明公开了二重荧光LAMP区分新城疫强弱毒检测引物组，包括引物1至引物6，它们分别具有序列表#.No.1至#.No.6的碱基序列，其中引物5和引物6为taqman 探针，它们使扩增反应具有很高的特异性，能分别与NDV强毒和弱毒的 F基因裂解位点杂合，反应后在不同波长的荧光下发出不同颜色的荧光，从而实现快速敏感特异的鉴别NDV强弱毒株。据此，发明人还研制了相应试剂盒并建立相应二重荧光LAMP方法。总之，本发明具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，仅需使用一台能控温的水浴锅和荧光成像仪，适合在基层兽医站和具备基本实验仪器的养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。

本发明具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，仅需使用一台能控温的水浴锅和荧光成像仪，适合在基层兽医站和具备基本实验仪器的养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。

新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的以感染禽类为主的一种急性、烈性传染病。尽管新城疫只有一个血清型，但是不同毒株之间的生物学特性存在明显差异。目前主要以NDV F蛋白的裂解位点为鉴别NDV强弱毒株的分子标记。

传统的检测方法需要使用昂贵的仪器和试剂等。环介导等温扩增技术(loop‑mediated isothermal amplification，LAMP)是由Notomi等于2000年建立的一种新型核酸扩增技术，该技术具有操作简便、反应快速、成本低廉和结果可视化等优点，目前在一些病原微生物的检测中被广泛运用。传统的LAMP检测方法中，创新性的加入taqman探针，反应时特异性的taqman探针会与扩增产物杂合并随着扩增进行过程水解，发出荧光。

目前，国内外均未见有建立二重荧光LAMP区分新城疫强弱毒可视化检测试剂盒和方法的相关报道。“新城疫病毒强弱毒株LAMP鉴别检测方法的建立”虽然报道了通过LAMP区分NDV强弱毒，但是该法需要3套不同的引物，并且检测时需要在3个不同反应管中进行并观测结果。

谢芝勋(1963.1一)，男，广西博白人。1983年毕业于广西农学院畜牧兽医系兽医专业。二级研究员，硕士研究生导师，现任广西壮族自治区兽医研究所副所长，国家“万人计划”领军人才、“新世纪百千万人才工程”国家级人选、享受国务院特殊津贴专家、广西特聘专家和广西优秀专家。主要从事动物传染病综合防控技术的研究，开展了一系列高水平科研项目的研究工作，先后主持了国家自然科学基金、国家科技成果转化项目、科技部、农业部、广西科技攻关重大专项和广西自然科学基金重点项目等30多个项目的研究，在动物传染病(包括禽病、猪病、牛病、虾病和贝类疾病等)防控技术的研发上取得一批具有国内领先和国际先进水平的科研成果，解决养殖业发展一系列技术关键问题，促进了行业技术进步，产生了显著经济效益和社会效益。

本发明只需要用1套引物，即可扩增所有的NDV F基因，并通过针对强弱毒株的F基因裂解位点特异序列的taqman探针只分别与强毒株和弱毒株序列杂合，反应过程中杂合探针水解释放游离荧光基团。反应只需要在一个反应管中进行反应，就可以根据反应后在荧光核酸成像仪下的颜色进行读取结果。且通过taqman杂合的方法，特异性更高，不受非特异性扩增的影响，也不受引物二聚体扩增的影响。而“新城疫病毒强弱毒株LAMP鉴别检测方法的建立”中用SYBR GREENⅠ，则不能对这些非特异性扩增或引物二聚体导致的假阳性加以区分。

总之，本发明具有比常规检测方法更特异、更敏感的特点，仅需使用一台能控温的水浴锅和荧光成像仪，适合在基层兽医站和具备基本实验仪器的养殖场中进行快速检测，具有较好的应用前景。

技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接此项目。。