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采用LAMP技术检测牛无浆体方法

成果类型:: 发明专利

发布时间: 2024-02-01 09:37:19

科技成果产业化落地方案
方案提交机构:成果发布人| 涂媛 | 2024-02-01 09:37:19

采用LAMP技术检测牛无浆体方法,该检测方法包括LAMP引物设计、LAMP反应体系建立以及采用LAMP检测方法,所述的LAMP检测方法是采用特异性检测、敏感性检测和荧光可视化检测,所述的LAMP引物设计利用PrimerExplorerV4软件针对牛无浆体16SrRNA基因的6个位点设计4条LAMP引物,引物包括两条外引物F3和B3、两条内引物FIP和BIP,其中:F3:GGGCATGTAGGTGGTTTGG;B3:GCGTGGACTACCAGGGTAT;FIP:TCTCCCGGACTCCAGTCTGGTAAAGGTGAAATGCCAGGGC;BIP:ATTAGGAGGAACACCAGTGGCGCACGCTTTCGCACCTCAG。该法以牛无浆体16SrRNA为靶基因位点,具有快速、灵敏、高效、低成本等特点,为牛无浆体病的病原检测提供新的技术方法。

针对现有技术的检测方法检出率低、操作繁琐等问题,本发明提供一种LAMP技术检测牛无浆体方法,该法以牛无浆体16S rRNA为靶基因位点,具有快速、灵敏、高效、低成本等特点,为牛无浆体病的病原检测提供新的技术方法。为了实现上述目的,本发明采用的技术方案是:采用LAMP技术检测牛无浆体方法,该检测方法包括LAMP引物设计、LAMP 反应体系建立以及采用LAMP检测方法,所述的 LAMP 检测方法是采用特异性检测、敏感性检测和荧光可视化检测,所述的LAMP引物设计利用Primer Explorer V4软件针对牛无浆体16S rRNA基因的6个位点设计4条LAMP引物,引物包括两条外引物F3和B3、两条内引物FIP和BIP。

与传统PCR方法相比,LAMP技术属于等温扩增,无需昂贵的热循环仪,并且由于LAMP反应中可以产生大量的副产物——白色焦磷酸镁沉淀,扩增产物可不经过电泳,无需开盖直接通过肉眼观察即可判定结果,在反应前、后加入染色剂效果更佳。LAMP技术敏感性高、特异性强、操作简便,能够满足现场和条件较差的基层实验室进行快速检测的需求。

此技术是河南农业大学宁长申研发,河南农业大学注册地位于河南省郑州市郑东新区龙子湖高校园区15号,法定代表人为介晓磊。经营范围包括培养高等学历农业人才,促进农业发展。 农学、农业工程、牧医工程、生物工程、经贸、林学、园艺、土地资源与管理、环境工程、信息管理与信息系统、食品科学与工程、英语、计算机科学与技术学科大专、本科、研究生班、硕士研究生、博士研究生学历教育 相关科学研究、继续教育、专业培训、学术交流与技术开发 农牧林业社会服务

本发明有以下优点:(1)扩增效率极高,60min内扩增产物可达到靶基因的9 10  10~10 倍;(2)本发明操作简单,只需在62℃恒温条件下将反应物混合,反应1h,不需要复杂的温度变化过程;(3)本发明建立的牛无浆体 LAMP检测方法灵敏性高,扩增模板只需10 copies/µL或更少;(4)本发明基于牛无浆体16S rRNA建立的LAMP方法特异性高,可检测牛无浆体,不能检测嗜吞噬细胞无浆体、绵羊无浆体、吕氏泰勒虫、莫氏巴贝斯虫、血吸虫;(5)本发明结果判定简单,可以通过添加1μL 10倍稀释的SYRB GreenⅠ染料,显色直接肉眼观察,不经过电泳。

技术转让,许可,合作所需资金需双方协商,此项技术想尽快落地保定,希望具备此项技术研发的技术方,能够尽快承接此项目。。