一种轮状病毒Vp4全基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组与表达，属于生物基因领域，其特征是：对重组质粒pGEM－T－Vp4和以thyA基因为选择压力的载体pW425t均以SalI、KpnI双酶切，切胶纯化后，以T4 DNA连接酶连接；连接产物转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态***中，在普通的LB固体培养基上培养，经生长功能弥补，筛选获得原核重组表达质粒pW425t－Vp4；其有益效果是：将猪A组轮状病毒Vp4全基因进行克隆、测序，与“疫苗级”以thyA基因为选择标记的可在乳酸菌和大肠杆菌之间穿梭表达的载体pW425t进行重组，通过检测，表明外源基因Vp4可以通过表达载体pW425t在大肠杆菌中表达并具有反应原性，为下一步在thyA基因缺陷型的乳酸菌受体菌株中表达提供理论基础和实验依据。

本发明的目的是：本发明提供了一种轮状病毒Vp4全基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组与表达，即猪A组轮状病毒Wa株Vp4全基因的基因序列、与“疫苗级”的非抗生素抗性的可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的质粒载体pW425t重组、乳酸杆菌、在大肠杆菌中的表达。

就目前在基因工程中需要解决的问题是如何纯化表达的蛋白，因为基因工程中所用的表达重组保护性抗原的受体菌株主要是活的减毒病原菌，而细菌疫苗的免疫保护力往往和菌株的残余毒力成正比。所以试图寻找能良好地表达外源性抗原且安全的受体菌株日益受到人们的关注。乳酸杆菌为人及动物体内正常菌群的重要成员，以乳酸杆菌作为表达外源保护性抗原基因的受体菌株，就可以将乳酸菌的生物学功能和外源功能抗原基因的特异性免疫相结合，Christiaens(1992)等研究发现：乳酸杆菌可以作为基因工程菌表达的外源基因，与大肠杆菌，相比较乳酸杆菌仅有一层细胞膜，目的蛋白可在信号肽的引导下直接分泌进入上清，从而容易获得目的蛋白。Allson(1996)等研究指出，乳酸杆菌是保护性抗原基因或免疫调节因子的良好的转化或表达系统，以乳酸杆菌为载体表达内源或外源蛋白，在功能食品、医疗保健等领域具有诱人的前景。这类疫苗的研制成功将为新型疫苗的发展探索一条新路。

此技术是吉林农业大学王春凤研发，吉林农业大学注册地位于吉林省长春市新城大街2888号。经营范围包括培养高等学历农业人才，促进农业发展。生物技术、生物工程、环境科学、财务管理、工商管理、市场营销、园林、环境工程、信息与计算科学、社会学、行政管理、食品科学、果树学、中药学等学科本科学历教育农业昆虫与害虫防治、土壤学、植物病理学、蔬菜学、植物营养学、临床兽医学、生物物理学等学科硕士学历教育作物栽培与耕作学、作物遗传育种学、预防兽医学、土壤学、农业经济管理学科博士研究生学历教育博士后培养

本发明的有益效果是：将猪A组轮状病毒Vp4全基因进行克隆、测序，与“疫苗级”以thyA基因为选择标记的可在乳酸菌和大肠杆菌之间穿梭表达的载体pW425t进行重组，并转化入thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态***中，经过生长功能弥补筛选阳性克隆pW425t-Vp4，通过SDS-PAGE和Western-blot检测，表明外源基因Vp4可以通过表达载体pW425t在大肠杆菌中表达并具有反应原性，为下一步pW425t-Vp4在thyA基因缺陷型的乳酸菌受体菌株中表达提供理论基础和实验依据。

技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地保定，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接此项目。。