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一种粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株的构建方法和应用
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2023-12-08 15:43:39
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：成果发布人| 王晓雯 | 2023-12-08 15:43:39
一种粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株的构建方法和应用，它涉及菌株构建以及发酵领域，本发明的目的是为了构建粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株，以提高其降解纤维素的能力，并通过与牛粪混合共发酵玉米芯，实现玉米芯降解效果，本发明首先设计粗糙脉胞菌引物，对NCU07340基因进行克隆，并与qa‑5myc.6His载体进行连接，成功构建载体质粒，将载体转入组氨酸缺陷型菌株4200his－中，Western杂交检验得到cbh‑1其表达蛋白大小约为90KDa。发现cbh‑1基因过表达菌株菌丝生长状态要强于野生菌株。在此基础上，本发明将cbh‑1基因过表达菌株与牛粪共同发酵玉米芯。本发明应用于玉米芯发酵领域。
1.一种粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株的构建方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：一、cbh-1基因获得设计引物对，以粗糙脉孢菌的基因序列为模板，进行PCR扩增，对PCR产物进行凝胶电泳，并胶回收目的基因片段；引物1 5'-ttcatCGATGAATTCATGCTCGCCAAGTTCGCTGC-3'；引物2 5'-GGCAAGCTGATCCCCCTCATACGGTGGATGTATTGCC-3'；二、无缝克隆构建载体对载体进行酶切，得到线性化载体；将步骤一获得的目的基因片段与线性化载体连接，获得无缝克隆构建载体；三、将步骤二得到的无缝克隆构建载体，转化到大肠杆菌感受态细胞内，验证目的基因成功转入大肠杆菌感受态细胞内后，即完成所述的粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株的构建。
构建粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株，以提高其降解纤维素的能力，并通过与牛粪混合共发酵玉米芯，实现玉米芯降解效果，本发明首先设计粗糙脉胞菌引物，对NCU07340基因进行克隆，可以广泛适用于菌株构建以及发酵领域等相关领域行业。
黑龙江大学有博士后科研流动站7个，博士后科研工作站3个。有博士学位授权一级学科10个，硕士学位授权一级学科35个，硕士专业学位类别18个。有国家重点学科1个，国家重点（培育）学科1个；有国家级一流本科专业建设点33个、国家级特色专业10个、国家级一流本科课程（含精品在线开放课程）15门、省级重点学科群1个、省级重点一级学科12个，省级“双一流”国际一流建设学科1个，省级“双一流”国内一流建设学科5个。
在此基础上，本发明将cbh‑1基因过表达菌株与牛粪共同发酵玉米芯。本发明应用于玉米芯发酵领域。可以有效降低成本，提高效率，具有环保、安全等优势。
本项目可以采用技术转让、技术合作等多种形式进行对接，欢迎有需求的企业单位联系洽谈。
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