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一种背根神经节神经细胞与软骨细胞共培养的方法及应用
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2023-11-17 11:24:47
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：天津市滨海新区| 宋学姮 | 2023-12-01 16:20:33
本发明提供了一种背根神经节神经细胞与软骨细胞共培养的方法及应用，所述共培养方法包括：分别构建无需支架材料的背根神经节神经细胞球和无需支架材料的软骨细胞球，再将所得神经细胞球和软骨细胞球进行3D共培养；其中，构建所述背根神经节神经细胞球和3D共培养使用的培养基为神经细胞完全培养基，构建所述软骨细胞球使用的培养基为软骨细胞完全培养基。本发明还提供了一种背根神经节神经细胞球和软骨细胞球3D共培养体系及其神经浸润检测方法。所述共培养方法操作简单，细胞生理状态良好，可作为模型用于相关疾病致病机理的研究中，具有广阔的应用前景。
1.一种背根神经节神经细胞与软骨细胞共培养的方法，其特征在于，所述共培养方法包括：
分别构建无需支架材料的背根神经节神经细胞球和无需支架材料的软骨细胞球，再将所得神经细胞球和软骨细胞球进行3D共培养；
其中，构建所述背根神经节神经细胞球和3D共培养使用的培养基为神经细胞完全培养基，构建所述软骨细胞球使用的培养基为软骨细胞完全培养基。
2.根据权利要求1所述的背根神经节神经细胞与软骨细胞共培养的方法，其特征在于，所述构建无需支架材料的背根神经节神经细胞球的方法包括：
分离背根神经节，剥离表面的结缔组织及两端纤维，保留神经细胞胞体，所得神经节组织置于培养板中培养，得到所述背根神经节神经细胞球；
优选地，所述分离背根神经节后，将其置于神经细胞基础培养基中；
优选地，所述神经细胞基础培养基的温度为2～5℃；
优选地，所述剥离表面的结缔组织及两端纤维在冰上进行；
优选地，所述剥离表面的结缔组织及两端纤维的时间不超过1h；
优选地，所述培养板包括低黏附培养板；
细胞处理： 对细胞进行必要的预处理，以确保它们在培养条件下保持良好的生存和活性。这可能包括细胞冻存、解冻、传代等步骤。
共培养实验： 将背根神经节神经细胞和软骨细胞放置在共同的培养环境中。这可以通过将它们直接混合或分别培养并在一定时间后合并实现。
培养条件优化： 优化培养条件，以促进两种细胞类型之间的相互作用。这可能包括温度、湿度、CO2浓度、培养基成分等参数的调整。
细胞观察和分析： 使用适当的细胞生物学和分子生物学技术观察和分析细胞。这可能包括细胞形态学观察、免疫细胞化学染色、蛋白质分析等。
数据采集和解释： 收集实验数据，并解释这两种细胞类型共培养的效果。这可能包括它们之间的相互作用、细胞增殖、分化等方面的信息。
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细胞获取： 获取背根神经节神经细胞和软骨细胞。这可能包括从动物模型（例如小鼠或大鼠）或人体组织中分离这些细胞。
培养基选择： 选择适当的培养基，以支持背根神经节神经细胞和软骨细胞的生长和功能。通常，这可能包括神经元培养基和软骨细胞培养基。
细胞处理： 对细胞进行必要的预处理，以确保它们在培养条件下保持良好的生存和活性。这可能包括细胞冻存、解冻、传代等步骤。
共培养实验： 将背根神经节神经细胞和软骨细胞放置在共同的培养环境中。这可以通过将它们直接混合或分别培养并在一定时间后合并实现。
培养条件优化： 优化培养条件，以促进两种细胞类型之间的相互作用。这可能包括温度、湿度、CO2浓度、培养基成分等参数的调整。
细胞观察和分析： 使用适当的细胞生物学和分子生物学技术观察和分析细胞。这可能包括细胞形态学观察、免疫细胞化学染色、蛋白质分析等。
数据采集和解释： 收集实验数据，并解释这两种细胞类型共培养的效果。这可能包括它们之间的相互作用、细胞增殖、分化等方面的信息。
技术转让
使用适当的细胞生物学和分子生物学技术观察和分析细胞。这包括细胞形态学观察、免疫细胞化学染色、蛋白质分析等。
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