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重组单纯疱疹病毒的亲和筛选细胞系及其构建方法和应用
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2023-11-09 16:17:34
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：天津市滨海新区| 宋学姮 | 2023-11-22 15:59:32
本发明提供了一种重组单纯疱疹病毒的亲和筛选细胞系及其构建方法，包括：构建表达HER2的跨膜区及胞外区HER2CT9基因的慢病毒Ls18；使用慢病毒表达载体pLs18包装所述慢病毒Ls18后感染小鼠黑色素瘤细胞系B16，获得所述亲和筛选细胞系B16‑HER2CT9；所述慢病毒表达载体pLs18如序列表中SEQ ID NO.10所示，所述HER2CT9基因如序列表中SEQ ID NO.7所示。基于如上所述的亲和筛选细胞系B16‑HER2CT9的应用，本发明还提供了一种单纯疱疹病毒的重组改造方法，通过亲和筛选细胞系B16‑HER2CT9选择性地从同源重组后的病毒细胞中筛选出重组单纯疱疹病毒，其工艺更加高效且获得纯度更高的重组单纯疱疹病毒。
1.一种重组单纯疱疹病毒的亲和筛选细胞系，其特征在于，所述亲和筛选细胞系命名为B16-HER2CT9，是采用慢病毒表达载体pLs18包装能够表达HER2CT9基因的慢病毒Ls18后感染小鼠黑色素瘤细胞系B16获得；
其中，所述慢病毒表达载体pLs18如序列表中SEQ ID NO.10所示，所述HER2CT9基因如序列表中SEQ ID NO.7所示。
2.一种如权利要求1所述的亲和筛选细胞系的构建方法，其特征在于，包括：
合成HER2的跨膜区及胞外区的HER2CT9基因，并在所述HER2CT9基因前连接核定位绿色荧光表达框H2B-EGFP，构建形成所述慢病毒Ls18；
构建所述慢病毒表达载体pLs18，使用所述慢病毒表达载体pLs18包装所述慢病毒Ls18后感染小鼠黑色素瘤细胞系B16，获得所述亲和筛选细胞系B16-HER2CT9；
其中，所述核定位绿色荧光表达框H2B-EGFP如序列表中SEQ ID NO.9所示。
疫苗研发： 构建重组HSV用于疫苗研发，通过亲和筛选细胞系可以提高病毒的稳定性和产量。
基因治疗： 利用亲和筛选细胞系构建重组HSV，用于基因治疗，例如通过携带特定基因的HSV来治疗某些遗传性疾病。
基因表达系统： 构建用于基因表达的重组HSV，并通过亲和筛选细胞系提高表达效率，用于生产重组蛋白。
病毒学研究： 利用亲和筛选细胞系构建特定基因缺陷的重组HSV，用于研究HSV生命周期、宿主相互作用等病毒学问题。
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选择宿主细胞系： 选择一种适当的细胞系，通常是容易被HSV感染的细胞，如Vero、HEK293等。
激活亲和筛选标记： 在宿主细胞中引入亲和筛选标记，例如荧光蛋白（GFP）、抗生素抗性基因（如Neomycin或Hygromycin抗性基因）等，以便在后续步骤中选择成功转染的细胞。
构建重组HSV质粒： 将目标基因或表达载体嵌入到HSV基因组中，通常使用质粒转染技术，确保质粒中包含HSV的必要序列。
转染宿主细胞： 利用适当的转染技术，将构建好的重组HSV质粒导入宿主细胞中。
亲和筛选： 在转染后，通过引入相应的亲和标记，例如在HSV质粒中包含的抗生素抗性基因，选择成功转染的细胞。
验证亲和筛选效果： 使用合适的分子生物学技术，如PCR、Western blot等，验证亲和筛选标记的存在和表达水平，确保细胞系能够支持重组HSV的稳定生长。
技术转让
重组单纯疱疹病毒（Herpes Simplex Virus, HSV）的亲和筛选细胞系是通过改造细胞系，使其能够选择性地支持特定的重组HSV的生长和增殖。
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