科创中国
一种表达TVA的小鼠模型的构建方法和应用
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2023-11-09 14:50:02
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：天津市滨海新区| 宋学姮 | 2023-11-27 11:04:51
本发明公开了一种表达TVA的小鼠模型的构建方法和应用。该方法包括：1)构建表达核定位绿色荧光和TVA受体的腺相关病毒载体；2)制备表达核定位绿色荧光和TVA受体的重组腺相关病毒；3)重组腺相关病毒通过尾静脉注射到小鼠体内，获得表达TVA的小鼠模型。本发明通过尾静脉注射进行全脑补偿TVA受体的方式构建表达TVA的小鼠模型，属于首次公开，比传统的转基因方法更灵活，周期短，应用更方便，成本更低。构建得到的表达TVA的小鼠模型可以使EnvARVG包装的SAD‑B19‑ΔG‑DsRed病毒有效地标记全脑上游直接输入网络，在特定脑区的结构与功能解析、疾病模型建立和基因治疗评估等方面具有广泛的应用价值和市场前景。
1.一种表达TVA的小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)构建表达核定位绿色荧光和TVA受体的腺相关病毒载体；
2)制备表达核定位绿色荧光和TVA受体的重组腺相关病毒；
3)重组腺相关病毒通过尾静脉注射到小鼠体内，获得表达TVA的小鼠模型。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述表达核定位绿色荧光和TVA受体的腺相关病毒载体的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述重组腺相关病毒为重组***型腺相关病毒。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，表达核定位绿色荧光和TVA受体的重组腺相关病毒的制备，具体操作为：将表达核定位绿色荧光和TVA受体的腺相关病毒载体与***血清型AAV衣壳质粒***、腺病毒元件辅助质粒pAd-Helper按质粒分子数1：1：1共转染HEK-293T细胞，分别收集上清和沉淀，利用碘克沙醇密度梯度离心法纯化病毒，获得重组腺相关病毒。
病毒学研究：
- 病毒追踪： TVA小鼠模型可用于病毒传播和追踪，特别是用于探索病毒的感染途径和分布。
- 病毒治疗： 通过病毒载体进行基因传递或治疗，TVA小鼠模型有助于评估病毒治疗方法的有效性。
神经科学研究：
- 神经元示踪： 将TVA与荧光标记基因结合，可以帮助研究神经元的追踪和连接。
- 病理学模型： 可以用于构建与神经系统相关疾病的模型，如癫痫、帕金森病等。
癌症研究：
- 肿瘤模型： TVA小鼠可用于构建肿瘤模型，用于研究癌症发生、发展和治疗。
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基因编辑技术：
- CRISPR/Cas9技术： 使用CRISPR/Cas9系统，设计sgRNA以精确编辑小鼠基因组，插入TVA基因序列或改造现有基因使其表达TVA。
- 基因敲入： 将TVA基因通过基因敲入技术嵌入小鼠基因组中的特定位置，通常在胚胎干细胞中完成，然后利用胚胎植入技术建立TVA转基因小鼠。
验证和鉴定：
- 分子生物学分析： 对编辑后的小鼠进行PCR、Western blot等分析，确认TVA基因的插入或表达情况。
- 免疫组化染色： 使用免疫组化染色技术在组织水平检测TVA蛋白的表达情况。
育种和鉴定纯合子：
- 育种： 如果是通过基因敲入，对正常表达TVA的小鼠进行育种，以获得纯合子（两个拷贝均为TVA）。
- 鉴定纯合子： 进行基因测序或其他技术鉴定确保后代小鼠是纯合子。
技术转让
构建表达转角蛋白（TVA）的小鼠模型通常需要利用基因编辑技术或转基因技术来实现。TVA通常被用于研究病毒学、神经科学和癌症等领域。
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