科创中国
污泥中胞内外DNA的分离方法及其携带耐药基因的检测方法
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2023-08-03 16:43:16
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：湖南省衡阳市| 黄荣华 | 2023-10-31 11:42:29
本发明涉及污水处理技术领域，尤其涉及分离污泥中胞内外DNA的方法及污泥中胞内外耐药基因的检测方法。
本发明提供的方法联合离子交换树脂法和十二烷基苯磺酸钠‑高盐法提取污泥胞外、胞内DNA，该方法提取获得的胞内外DNA无明显交叉污染。采用特异性引物对提取产物扩增，可成功区分污泥中胞内外耐药基因，有望用于探究污泥中不同形态耐药基因的时空分布特征，并为今后开发相应的耐药基因风险评估方案和消除手段提供依据。
在污水处理系统中， 污泥内耐药基因按物理学形态可分为细胞内耐药基因和细胞外耐药基因。耐药基因形态不同， 其环境行为特征亦不相同。然而， 目前有关污水处理系统中耐药基因分布规律和消长特性的研究几乎均将污泥这一研究对象视作整体予以考虑， 而未区分其形态。不同形态耐药基因的研究主要涉及前期不同形态DNA提取和后期不同形态耐药基因的定量检测。 耐药基因的定量检测手段相对较为成熟和统一， 但能够实现完整、 无交叉污染的不同形态DNA的提取至今仍是一项极具挑战的任务。考虑到污泥中胞内和胞外耐药基因不同的繁殖模式、传播模式和消除难度， 有必要开发不同形态耐药基因的定量检测方法。
南华大学是由工业和信息化部、国家国防科技工业局、中国核工业集团公司、中国核工业建设集团公司与湖南省人民政府共建，成立于1958年的全日制公立综合性大学。学校由原隶属中国核工业部的中南工学院、核工业第六研究所与原隶属湖南省的衡阳医学院合并组建而成。学校座落在历史文化名城湖南省衡阳市市区，占地面积3000亩。团队成员有周帅，张雨，高媛媛，唐振平，刘金香。
联合离子交换树脂法和SDS‑高盐法提取污泥胞外、 胞内DNA。离子交换树脂2+ 2+法能够通过化学作用去除污泥胞外基质中Ca 和Mg 等骨架离子， 高效破坏胞外DNA与其他聚合物之间的相互作用， 且对细胞完整性的影响较小； 而SDS‑高盐法提取的胞内DNA回收率高。采用CTAB与/或苯酚‑氯仿‑异戊醇法纯化的污泥胞外、 胞内DNA纯度高， 适用于qPCR检测耐药基因。 因此， 本发明能够满足污泥中胞内外DNA提取的基本要求：(1)胞外DNA回收率高，能够代表胞外DNA库， 且无胞内DNA污染；(2)胞内、 外DNA同时回收；(3)胞内、外DNA纯度高，适用于后续分子生物学研究。本发明可成功区分污泥中胞内外耐药基因， 有望用于探究污泥中不同形态耐药基因的时空分布特征， 并为今后开发相应的耐药基因风险评估方案和消除手段提供依据。
本技术具有较强的财务盈利能力，其财务净现值良好，投资回收期合理。综上所述，该技术属于国家鼓励支持的项目，技术的经济和社会效益客观，技术的投产将改善优化当地产业结构，实现高质量发展的目标。技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地保定，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接次项目。
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