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负载新城疫病毒F基因质粒DNA的LDHSiO2纳米粒的制备方法

成果类型：: 发明专利

发布时间: 2023-07-07 14:34:03

科技成果产业化落地方案
方案提交机构：“科创中国”黑龙江科技服务团| 邓珂骁 | 2023-11-07 09:43:50
成果简介 技术亮点 应用前景 团队概括 产生的效益 转化方式
负载新城疫病毒F基因质粒DNA的LDHSiO2纳米粒的制备方法，涉及一种负载新城疫DNA疫苗纳米粒的制备方法。是要解决现有DNA疫苗抗原肌注给药易被胃肠道内的代谢酶和酸性环境降解，需多次免疫，不能够实现缓释和黏膜免疫，质粒DNA免疫原性较弱，需用较强的免疫佐剂或合适的基因递送系统才能有效诱导免疫应答的问题。方法：一、采用溶胶凝胶法合成SiO2纳米粒；二、pVAX1-optiF/SiO2纳米粒的合成；三、载新城疫F基因质粒DNALDHSiO2纳米粒的合成。本发明克服了抗原质粒DNA易被降解、免疫持续时间短、次数多等缺点，方法简单，条件温和，生产成本低、易于规模化生产。用于DNA疫苗领域。
本发明的技术方案是采用溶液凝胶法合成不同粒径的介孔SiO2，再用共沉淀法在介孔SiO2表面包覆LDH，形成LDHSiO2，借助核结构完成对新城疫病毒F基因质粒DNA的搭载，建立新城疫DNA疫苗纳米化的安全级黏膜免疫递送系统(pDNA-LDHSiO2-NPs)。本发明合成的LDHSiO2既具有LDH体内分散性好、对pH敏感、Zeta电位高，又具有能延长抗原滞留、利于DC识别、促进DC成熟和向淋巴结趋化的优势，解决了单纯LDH作为DNA疫苗所面临的问题；同时，LDHSiO2具有SiO2介孔结构特点，突破了LDH搭载质粒DNA有限的瓶颈。 本发明制备的pFDNA-LDHSiO2-NPs克服了抗原质粒DNA易被降解、免疫持续时间短、免疫次数多等缺点，且制备方法简单易行，条件温和，生产成本较低、易于规模化生产。
本研究按照标书的要求完成了全部研究目标。脂肪组织来源的间充质干细胞（ ADSC）是多能细胞，可以分化为各种细胞类型。本研究旨在探讨ghrelin对大鼠ADSCs神经分化的影响及其分子机制。对大鼠ADSCs进行分离，并采用第三通道ADSC s进行研究..用流式细胞术分析MSCs表面表达标记， CD90、CD44 和CD29阳性， CD34、CD45阴性，对分离的ADSC进行了表征。CD过11b脂/2肪f/c.、成骨和神经分化证实了ADSCs的多系分化。诱导神经发生后，利用免疫荧光和westernblot开发神经元样形态和表达神经标记物，包括GFAP、Nestin、MAP2和β-Tubulin III，鉴定分化细胞。葛瑞林浓度依赖性地提高了神经样细胞和分支树突的比例，以及asup-调节了neurlmarkers的表达。此外， ghrelin增加了核β-catenin、p-GSK-3β、p-AKT和p-mTOR的表达，表明ghrelin治疗后激活了β-catenin和AKT/mTO R信号。重要的是，抑制β-catenin或AKT/mTO R信号抑制了ghrelin诱导的神经发生。因此，我们证明ghrelin通过激活β-catenin和AKT/mTO R信号通路来促进ADSC的神经分化。
本发明的技术方案是采用溶液凝胶法合成不同粒径的介孔SiO2，再用共沉淀法在介孔SiO2表面包覆LDH，形成LDHSiO2，借助核结构完成对新城疫病毒F基因质粒DNA的搭载，建立新城疫DNA疫苗纳米化的安全级黏膜免疫递送系统(pDNA-LDHSiO2-NPs)。本发明合成的LDHSiO2既具有LDH体内分散性好、对pH敏感、Zeta电位高，又具有能延长抗原滞留、利于DC识别、促进DC成熟和向淋巴结趋化的优势，解决了单纯LDH作为DNA疫苗所面临的问题；同时，LDHSiO2具有SiO2介孔结构特点，突破了LDH搭载质粒DNA有限的瓶颈。 本发明制备的pFDNA-LDHSiO2-NPs克服了抗原质粒DNA易被降解、免疫持续时间短、免疫次数多等缺点，且制备方法简单易行，条件温和，生产成本较低、易于规模化生产。
一、项目概况 （1）项目承担单位基本情况 牡丹江恒丰纸业股份有限公司是国内最大的卷烟配套用纸生产基地，主要产品有卷烟纸、滤棒成型纸、烟用接装纸原纸、铝箔衬纸、圣经纸等高技术附加值的特种工业用纸。是牡丹江市财政支柱企业之一。 （2）项目名称及编号 项目名称《HF-自透烟用接装纸原纸》；项目编号：G2013g0002。 （3）项目背景 为满足烟草行业降焦减害、健康、环保的新要求，我公司与湖南中烟等烟厂技术中心合作，共同进行了该项目的开发。 通过对激光和静电打孔接装原纸打孔原理和不同透气度指标对烟气指标的影响研究，我们针对不同牌号卷烟产品焦油和CO含量进行了不同自然透气度产品的研发，研制生产了50CU～500CU系列透气度产品，通过烟气指标测试结果对比，自然透气度产品较使用激光或静电打孔产品相比可有效改善卷烟抽吸时的燥、刺感，并可有效降低卷烟烟气中的CO含量，由于自然孔隙使滤棒通风更均匀，对烟气的粒相物吸附也更均匀。 二、项目执行情况 （1）项目投资构成和经费支出情况 项目总投资145.21万元，其中10万元市科技拨款。 技术 开 发 费 19.54万元 实验 材 料 费 42.62万元 折旧费 34.42万元 薪酬 40.68万元 差旅费 7.95万元 合 计 145.21万元 （2）项目实施完成情况 ① 技术指标完成情况 项
技术转让、合同、入股均可，具体资金双方协商，希望尽快落地实现产业化。