科创中国
一种纳豆菌发酵菜用大豆等外品产纳豆激酶的方法
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2023-05-31 09:42:34
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：“科创中国”黑龙江科技服务团| 武新影 | 2023-11-10 11:07:41
本发明涉及微生物发酵技术领域，具体地涉及一种纳豆菌发酵菜用大豆等外品产纳豆激酶的方法，包括：将配制好的纳豆菌菌液按2％接种到经挑选、清洗、蒸熟灭菌后的菜用大豆等外品中，在37℃恒温培养箱中发酵36小时，后熟18小时，盐溶离心得初提取液，硫酸铵盐析初步纯化得粗酶液，再用DEAE离子交换柱层析进一步纯化。本发明的目的是为发酵产纳豆激酶提供一种新的思路，以及为公司等外品的处理问题提供解决方案。最佳发酵工艺下生产的纳豆激酶活力可达到2326.60IU/g；经SDS‑PAGE电泳试验验证，所提取的纳豆激酶的分子质量为25～35kDa之间，回收率和纯化倍数分别为4.9％和11.2倍；本发明为纳豆激酶的生产及后续的体内试验提供了理论基础。
与现有技术相比，本发明的一种纳豆菌发酵菜用大豆等外品产纳豆激酶的方法，采用菜用大豆等外品发酵生产纳豆激酶，发酵底物“新”且充足；发酵条件简单、快速，产酶活高；本发明为发酵产纳豆激酶提供一种新的思路，以及为公司等外品的处理问题提供解决方案。最佳发酵工艺下生产的纳豆激酶活力可达到2326.60IU/g；经SDS-PAGE电泳试验验证，所提取的纳豆激酶的分子质量为25～35kDa之间，其比活力可达到2451.02IU/mg，回收率和纯化倍数分别为4.9％和11.2倍。纳豆激酶的最适温度为37℃，在低于40℃时稳定性较好，最适pH值为8.0，pH值在6.0～8.0的范围内较稳定；在胃肠道环境中不稳定，应制成肠溶性产品才能发挥更大作用；体外试验表明：该酶具有良好的体外溶栓作用。本发明为纳豆激酶的生产及后续的体内试验提供了理论基础。
技术说明：乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）的持续感染是导致慢性肝病最常见的原因。由HBV持续感染所引起的病毒性肝炎、肝硬化和肝癌己成为严重危害人类健康的疾病。核苷类似物通过抑制多聚酶或逆转录酶而能发挥抗病毒作用，具有用药方便、抑制HBV复制作用迅速等优点，故目前在临床上已成为治疗乙肝的主要抗病毒药。然而长期使用核苷类似物，在宿主免疫反应和药物的选择压力下，HBV的各种变异和耐药株不断出现。交叉耐药及多耐药（多重耐药）使临床出现更多难治性乙肝病毒感染者。
随着核苷类似物在抗病毒治疗中的广泛应用，发生各种已知和未知变异的HBV耐药毒株还将不断出现。研制与核苷类似物作用靶点不同的各种新型药物，将有效地克服目前常见的核苷类耐药的问题。因此本研究欲将ASP-RNAi技术应用于HBV交叉耐药、多耐药问题中，从分子水平深入探讨HBV的交叉耐药、多耐药机制，同时寻求对交叉耐药型HBV的有效治疗药物，为今后发展特异性的抗HBV交叉耐药株的基因药物治疗提供新的思路与技术平台。
本课题研究技术指标如下：
1.本研究对多耐药HBVDNA全基因S、C、P、X区变异位点进行分析。除C区较稳定，变异位点较少，未发现共同变异位点外，S区、X区均发现多个共同变异位点。S区T56N、K57Q、D62A、V157A位点19个克隆均发生相同变异；分析S区HBV的变异能否会导致机体在免疫清除
黑龙江大学（Heilongjiang University），位于黑龙江省哈尔滨市，是黑龙江省人民政府和中华人民共和国教育部、国家国防科技工业局共建的省属综合性大学，黑龙江省“双一流”建设国内一流大学A类高校，入选国家卓越法律人才教育培养计划、中西部高校基础能力建设工程、特色重点学科项目、国家建设高水平大学公派研究生项目、中国政府奖学金来华留学生接收院校、全国深化创新创业教育改革示范高校、教育部来华留学示范基地，是世界翻译教育联盟、中俄新闻教育高校联盟、中俄综合性大学联盟、上海合作组织大学、“一带一路”智库合作联盟成员单位。
根据国家能源集团等高端铁路货车用户最大程度提高运能、增加运输效益的需求，本项目进行了大容积车体结构、铝合金轻量化、树脂基连续纤维增强复合材料、高弹耐磨防腐涂层、自卸式底门开闭机构、无附加机构稳定型转向架、5车3阀制动系统、高强度车钩缓冲装置、轻量化牵引杆、中梁组装生产线等关键技术研究，研制了基于轻量化技术的30t轴重KM100型轻量化铝合金煤炭漏斗车，实现车辆轴重30t、自重19.8t、载重100t的性能指标，整体技术水平达到世界领先水平。
技术转让、合同、入股均可，具体资金双方协商，希望尽快落地实现产业化。
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