科创中国
DNA结合蛋白的检测方法
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2023-05-10 13:07:16
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：天津市滨海新区| 宋学姮 | 2023-05-18 11:27:16
本发明公开了一种DNA结合蛋白的检测方法，包括如下步骤：提供待检测的DNA结合蛋白的样品溶液，在ExoIII存在的条件下进行消化反应，反应完全后得到消化液；将消化液加入到扩增体系中，在聚合酶、内切酶和扩增模板存在的情况下，进行等温扩增反应后得到扩增液；将纳米金颗粒溶液与含有第一检测探针和第二检测探针的溶液混合后进行孵育后得到纳米金检测探针溶液；将扩增液和纳米金检测探针溶液混合后对混合液进行检测，完成DNA结合蛋白的检测。这种DNA结合蛋白的检测方法，通过第一检测探针和第二检测探针与扩增产物中靶DNA的结合，使得结合了检测探针的纳米金颗粒发生聚集，导致混合液的颜色发生变化，现象直观，灵敏度较高。
1.一种DNA结合蛋白的检测方法，包括如下步骤：提供待检测的DNA结合蛋白的样品溶液，在Exo III存在的条件下进行消化反应，反应完全后得到消化液，其中，未被Exo III切割的DNA的反义链作为引物被保留在所述消化液中；将所述消化液加入到扩增体系中，在聚合酶、内切酶和扩增模板存在的情况下，进行等温扩增反应，反应完全后得到扩增液，其中，所述扩增模板包括n段重复序列以及n-1段依次连接所述重复序列的连接序列，所述引物与所述重复序列特异性结合，所述连接序列包括所述内切酶的酶切位点，n为不小于2的整数，所述引物扩增后得到所述扩增模板的互补序列，所述扩增模板的互补序列被所述内切酶切割形成n段包含所述重复序列的靶DNA；提供纳米金颗粒溶液，并将所述纳米金颗粒溶液与含有第一检测探针和第二检测探针的溶液混合后进行孵育，孵育完成后得到纳米金检测探针溶液，其中，所述第一检测探针与所述靶DNA特异性互补，所述第二检测探针与所述靶DNA特异性互补；将所述扩增液和所述纳米金检测探针溶液混合，反应完全后对混合液进行检测，完成所述DNA结合蛋白的检测。
简单灵敏的检测人体细胞中转录因子对于临床诊断W及药物的筛选有着重要的 意义。目前的检测方法都是基于电泳迁移，免疫化学或者是巧光检测的方法，该些方法都是 通过非扩增而直接进行检测，因此灵敏度较低。而且该些方法存在着放射性污染或者需要 特异性抗体和巧光标记的探针，大大增加了实验成本和实验的复杂性。
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该种DNA结合蛋白的检测方法，通过特异性互补的检测探针与扩增产物中的祀 DNA结合，使得结合了第一检测探针和第二检测探针的纳米金颗粒发生聚集，导致混合液的 颜色发生变化。与传统的DNA结合蛋白的检测方法相比，该种DNA结合蛋白的检测方法由 于结合了扩增方法与纳米金比色法，灵敏度较高，实验现象简单直观。
技术合作
上所述实施例仅表达了本发明的一种或几种实施方式，其描述较为具体和详 细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技 术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可W做出若干变形和改进，该些都属于本发 明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应W所附权利要求为准。
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