抑制GCF基因表达的SiRNA及其载体和应用
成果类型:: 发明专利
发布时间: 2022-10-28 14:46:54
本发明公开了一种抑制GCF基因表达的SiRNA,属于医药基因工程领域。编码所述SiRNA的DNA选自(a)、(b)、(c)中的任意一组:(a)正义链的碱基序列如SEQ?ID?No.1所示,反义链的碱基序列如SEQ?ID?No.2所示;(b)正义链的碱基序列如SEQ?ID?No.3所示,反义链的碱基序列如SEQ?ID?No.4所示;(c)正义链的碱基序列如SEQ?ID?No.5所示,反义链的碱基序列如SEQ?ID?No.6所示。本发明还公开了包含所述编码SiRNA的DNA的重组表达载体,以及GCF-shRNA-HeLaCGMCC?No.5821,该细胞系的RNA干扰效率高,特异性强,无毒副作用,能有效抑制GCF基因的表达。本发明的抑制GCF基因表达的SiRNA、重组表达载体、GCF-shRNA-HeLa单克隆细胞还可用于制备治疗宫颈癌的药物。
1.一种抑制GCF基因表达的SiRNA,其特征在于,编码所述SiRNA的DNA:正义链的碱基序列如SEQ ID No.1所示,反义链的碱基序列如SEQ ID No.2所示。2.一种包含权利要求1中所述的编码所述SiRNA的DNA的重组表达载体。3.根据权利要求2所述的重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体是基于pGPU6/GFP/Neo载体构建的载体。
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指内源性或外源性双链RNA(dsRNA)介导的细胞内mRNA发生特异性降解,从而导致靶基因的表达沉默,产生相应的功能表型的缺失现象。RNAi是一种从低等生物到哺乳动物都有的保守的防御机制。双链RNA在细胞内被Dicer酶切成约19-22nt的小片段干扰RNA(SiRNA)进而形成SiRNA-蛋白复合物(siRNP),SiRNA通过识别、降解具有同源序列的mRNA最终导致特异性的基因表达沉默(gene silencing)(Liu JY等,RNAi-gene silencing mediated by dsRNAs,Section Genet Foreign Med Sci,2004,27(1):4-10)。因此,RNA干扰技术近年来日益受到人们的重视。SiRNA技术正在逐步应用在研究基因功能、细胞信号转导途径分析、冗余基因的确定、药物开发中靶标验证、基因治疗、病毒感染、癌症和显性遗传病治疗等。
河北医科大学是河北省重点骨干大学,初名北洋医学堂,1894年由直隶总督兼北洋大臣李鸿章于天津创办,是中国近代第一所官办西医院校。辛亥革命后,1912年1月19日国民政府教育部颁发《普通教育暂行办法通令》,北洋医学堂改为北洋医学校。1912年10月22日,国民政府教育部又颁发《专门学校令》“十六”号令,据此1913年(民国二年)9月北洋医学校更名为直隶公立医学专门学校,并开始招收本科生。1915年学校迁至保定。1937年7月7日抗日战争全面爆发,学校被迫停办。1946年1月复校招生。1949年4月更名为河北医学院。1958年学校由保定迁至石家庄。1995年,原河北医学院、河北中医学院、石家庄医学高等专科学校三校合并为河北医科大学。2013年河北中医学院恢复独立建制。2016年,学校成为教育部、国家卫生健康委员会、河北省人民政府共建高校。“十三五”期间,学校制定了“建设特色鲜明的高水平医科大学”的发展目标。
本发明具有如下优点和有益效果:(1)本发明提供了三对能有效地抑制GCF基因表达的SiRNA序列;(2)构建了能稳定表达上述SiRNA序列的载体;(3)本发明转染成功获得具有抑制GCF基因表达的SiRNA功能的细胞系,优选为GCF-shRNA-HeLa CGMCC No.5821,该细胞系属于单克隆,RNA干扰效率高,能有效抑制GCF基因的表达,同时使具有SiRNA同源序列的基因表达沉默而不影响其它基因的功能,所以该细胞系特异性强,无毒副作用;
技术转让,许可,合作所需资金需双方协商,此项技术想尽快落地保定,希望具备此项技术研发的技术方,能够尽快承接次项目