一种适用于杜鹃花属物种鉴定的matK引物及方法
成果类型:: 发明专利
发布时间: 2022-10-26 13:27:55
本发明涉及分子生物学DNA技术领域,提出了一种适用于杜鹃花属物种鉴定的matK引物,所述引物为一对;正向引物matK‑390F的核苷酸序列(5’‑3’)为CGATCTATTCATTCAATATTTC;反向引物 m a t K‑R h _ R 的 核 苷 酸 序 列 ( 5’‑3’) 为GCCCGCTATAATAATGAGAAAGAYTTC。通过上述技术方案,解决了现有技术中的引物对杜鹃花属植物进行扩增时成功率低的问题。
一种适用于杜鹃花属物种鉴定的matK引物,其特征在于,所述引物为一对;正向引物matK‑390F的核苷酸序列(5’‑3’)为CGATCTATTCATTCAATATTTC反向引物matK‑Rh_R的核苷酸序列(5’‑3’)为GCCCGCTATAATAATGAGAAAGAYTTC。包括以下步骤:S1、提取杜鹃花属植物标本的总DNA;S2、引物PCR扩增得到PCR产物,所述引物为:matK‑390F(5’‑3’)(CGATCTATTCATTCAATATTTC)matK‑Rh_R(5’‑3’)(GCCCGCTATAATAATGAGAAAGAYTTC);S3、检测PCR扩增结果;S4、将所述PCR产物进行测序;S5、将DNA序列进行比对调整;S6、对调整好的序列进行建树并进行聚类分析。
杜鹃花属是杜鹃花科中种类最多、特有性极强的大属。杜鹃花属植物具有重要的观赏价值和医药价值,市场前景广阔。由于其种类繁多,仅有极少数专家能够通过形态特征进行准确鉴定。目前,DNA条形码技术已被广泛应用于物种(品种)的鉴定工作中,matK就是常用的DNA条形码之一。但前人利用常用的matK引物对杜鹃花属植物进行扩增时,成功率却很低。
河北师范大学是一所具有百年历史和光荣传统的省属重点大学。学校起源于1902年创建于北京的顺天府学堂和1906年创建于天津的北洋女师范学堂。1996年6月,原河北师范大学、河北师范学院与创建于1952年的河北教育学院、创建于1984年的河北职业技术师范学院合并,组建成新的河北师范大学。校友中有老一代革命家邓颖超、刘清扬、郭隆真、杨秀峰、康世恩、荣高棠等,有学界名人梁漱溟、张申府、汤用彤等,有中科院院士严陆光、郝柏林等,也有许绍发、蔡振华等一批体育界精英。新中国成立以来,学校共为国家培养了20余万名专业人才。 学校新校区占地1829亩,馆藏图书340.64万册。学校现有在职教职工2856名,其中专任教师1577人,教授405人,副教授994人,中国科学院院士1人,省级以上各类优秀专家106人,博士研究生导师108人,硕士研究生导师578人。在校本、专科生36371人,研究生4191人,成人教育学生14760人。
根据GenBank中杜鹃花属植物所有的matK基因序列信息,发明人通过数次实验探究,重新设计了matK反向引物matK‑Rh_R(GCCCGCTATAATAATGAGAAAGAYTTC)。本研究利用62(品)种、116号杜鹃花属植物标本对引物“matK‑Rh_R”进行验证。结果显示,使用新引物“matK‑Rh_R”对供试材料进行PCR扩增和测序时,PCR扩增成功率和测序成功率均为100%。这说明,新引物“matK‑Rh_R”可用于杜鹃花属植物相关研究工作中。利用测序得到的matK序列对供试的实验材料进行聚类分析,matK基因可将杜鹃花属62(品)种分为11类,且同一品种在同一分支中。这一结果说明matK基因可用于杜鹃花属的初步鉴定研究工作中,使得matK这一分子标记可以被很好地应用于杜鹃花属植物的鉴定、系统发育学研究、物种多样性保护及中医药研究等工作中。
技术转让,许可,合作所需资金需双方协商,此项技术想尽快落地保定,希望具备此项技术研发的技术方,能够尽快承接次项目