本发明公开了一种具有编码高活性反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶的基因片段及其应用， 对指孢囊菌（***1） 中 反 式-4-羟 基-L-脯 氨 酸 羟 化 酶（GenBankID:BAA20094.1）基因密码子进行优化获得p4hyd基因，对优化后p4hyd基因进行截短， 获得P4Hyd1-257基因， 分别构建重组质粒pET-M-3C-P4Hyd和pET-M-3C-P4Hyd1-257，通 过大肠杆菌进行原核表达， 以菌体作酶源转化生产反式-4-羟基-L-脯氨酸。 实验结果表明，以L-脯氨酸为底物， 相比于pET-M-3C-P4Hyd，pET-M-3C-P4Hyd1-257转化生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的最高转化率由91.4%提高到97.4%， 转化反应时间由80小时缩短到60小时， 转化率得到明显提高， 转化时间明显缩短。本发明可用于生物转化法生产L-羟脯氨酸，具有较好的工业应用前景。

一种编码高活性反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶的基因片段，其特征在于该片段的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。包括以下步骤：将所述编码高活性反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶的基因片段， 与表达载体pET-M-3C连接，转化至大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)中， 并诱导蛋白表达。用于以L-脯氨酸为底物，生物转化法生产反式-4-羟基-L-脯氨酸。

近年来， 羟脯氨酸的研究和开发已引起医药、 生化、 食品及美容业等方面的广泛关注。 在医药方面，由于其具有多种生理功能与独特的生物活性，可作为各种软组织疾病的药物， 如结缔组织受损、风湿性关节炎等，又可加快伤口愈合，治疗各种皮肤疾病。反式-4-羟基-L-脯氨酸易于衍生化， 药理活性多样， 近年来逐渐被应用到医药原料药手性中间体领域， 用于合成新一代培南类抗生素、 抗肿瘤、抗高血压及新型胃药等多种新创制药物的合成。 由于其具有抗氧化、抗辐射的作用，在美容业方面，可以作为化妆品添加剂。目前，  世界用量为500吨/年以上，   其需求量仍然呈逐年增加趋势.

河北师范大学是一所具有百年历史和光荣传统的省属重点大学。学校起源于1902年创建于北京的顺天府学堂和1906年创建于天津的北洋女师范学堂。1996年6月，原河北师范大学、河北师范学院与创建于1952年的河北教育学院、创建于1984年的河北职业技术师范学院合并，组建成新的河北师范大学。校友中有老一代革命家邓颖超、刘清扬、郭隆真、杨秀峰、康世恩、荣高棠等，有学界名人梁漱溟、张申府、汤用彤等，有中科院院士严陆光、郝柏林等，也有许绍发、蔡振华等一批体育界精英。新中国成立以来，学校共为国家培养了20余万名专业人才。 学校新校区占地1829亩，馆藏图书340.64万册。学校现有在职教职工2856名，其中专任教师1577人，教授405人，副教授994人，中国科学院院士1人，省级以上各类优秀专家106人，博士研究生导师108人，硕士研究生导师578人。在校本、专科生36371人，研究生4191人，成人教育学生14760人。

本发明优点在于：在相同条件下，密码子优化基因p4hyd及截短基因p4hyd1-257的最高转化率分别为91.4%和97.4%，  达到最高转化率所需时间分别为80小时和60小时。  可见本发明通过截短反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶基因长度， 提高了酶活性， 使催化L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸的转化率得到了很大提高，转化时间大大缩短，具有较好的工业应用前景。

技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地保定，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接次项目