本发明公开了一种具有高转化率的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶改造基因及其应用。 通过优化指孢囊菌（***1） 中 反 式-4-羟 基-L-脯 氨 酸 羟 化 酶（GenBankID:D78338.1）的核苷酸序列， 构建优化基因的表达载体， 通过原核表达， 收集菌体作为转化反应的酶源， 实验结果表明， 以L-脯氨酸为底物， 生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的转化率高达91%。 本发明可用于生物法生产反式-4-羟基-L-羟脯氨酸，具有较好的工业应用价值。

一种具有高转化率的反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶改造基因序列，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。将所述改造基因构建于表达载体中， 并转化到大肠杆菌中；所述表达载体为pET-28a或pET-M-3C，所述大肠杆菌为***(DE3)或BL21-CodonPlus(DE3)。在LB培养基中28°C培养至OD600为0.5-1.0时， 加0.1-0.5mM的IPTG， 于16-20°C低温诱导8-12h， 收集菌体作为转化反应的酶源。用于生物法生产反式-4-羟基-L-羟脯氨酸。

近些年来，Hyp的研究和开发已经引起医药、 生化、 食品及美容业等方面的广泛关注。 在医药领域，Hyp具有多种生理功能与独特的生物活性，既可作为各种软组织疾病的药物， 如结缔组织受损、 风湿性关节炎等， 又可加快伤口愈合， 以及治疗各种皮肤疾病；作为氨基酸注射液的重要组分， 它对急慢性肝病所导致的低蛋白血症有一定的疗效；Hyp参与脂肪的乳化及红细胞血红素和球蛋白的形成， 具有调节脂肪乳化等作用；它还是多种药物， 如第三代抗生素、 抗肿瘤、 抗高血压及新型胃药等的合成原料。 它具有减肥作用， 可望成为比较理想的减肥药物。 在化妆品添加剂领域， 由于其具有抗氧化、 抗辐射的作用， 是化妆品的重要添加剂。 在农业生产上， 主要用作杀虫剂和抗旱剂。 反式-4-羟基-L-羟脯氨酸存在两个手性中心， 易于衍生化， 药理活性多样， 近年来逐渐被应用到医药原料药手性中间体领域， 用于合成新一代培南类抗生素和多种新创制药物的合成。目前，  反式-4-羟基-L-羟脯氨酸的世界用量为500吨/年以上，   其需求量仍然呈逐年增加趋势。

河北师范大学是一所具有百年历史和光荣传统的省属重点大学。学校起源于1902年创建于北京的顺天府学堂和1906年创建于天津的北洋女师范学堂。1996年6月，原河北师范大学、河北师范学院与创建于1952年的河北教育学院、创建于1984年的河北职业技术师范学院合并，组建成新的河北师范大学。校友中有老一代革命家邓颖超、刘清扬、郭隆真、杨秀峰、康世恩、荣高棠等，有学界名人梁漱溟、张申府、汤用彤等，有中科院院士严陆光、郝柏林等，也有许绍发、蔡振华等一批体育界精英。新中国成立以来，学校共为国家培养了20余万名专业人才。 学校新校区占地1829亩，馆藏图书340.64万册。学校现有在职教职工2856名，其中专任教师1577人，教授405人，副教授994人，中国科学院院士1人，省级以上各类优秀专家106人，博士研究生导师108人，硕士研究生导师578人。在校本、专科生36371人，研究生4191人，成人教育学生14760人。

本发明取得的有益效果：本发明通过优化反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶基因， 构建其工程菌株， 并诱导表达反式-4-羟基-L-脯氨酸羟化酶蛋白， 以菌体作为转化反应酶源， 催化L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸的转化率得到了很大提高， 降低了反应产物中L-脯氨酸的量， 有利于反应产物反式-4-羟基-L-脯氨酸的纯化分离， 具有较好的工业应用前景。

技术转让，许可，合作所需资金需双方协商，此项技术想尽快落地保定，希望具备此项技术研发的技术方，能够尽快承接次项目