本发明提供一种鲤LPL1重组蛋白,并公开了氨基酸序列和核苷酸序列,氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本发明提供一种包含鲤LPL1重组蛋白基因的质粒。本发明提供一种鲤LPL1重组蛋白的制备方法。本发明采用SlyD或Skp作为重组蛋白的融合标签,可以促进目标蛋白的正确折叠和复性,可以提高目标蛋白的表达量和可溶性

采用SlyD或Skp作为重组蛋白的融合标签；其中：LPL1基因序列如SEQ ID NO.5所示，SlyD基因序列如SEQ ID NO.6所示，Skp基因序列如SEQ ID NO.7所示。LPL1和SlyD之间，LPL1和Skp之间通过碱基序列GAATTC连接，而且实验证实不影响LPL1功能。对裂解敏感蛋白D(sensitive to lysi s D，SlyD)是一种分子量为28kDa的分子伴侣蛋白，能够促进蛋白的正确折叠，SlyD蛋白的C末端含丰富的组氨酸，能够与Ni2+结合。Skp(Seventeen-Ki lodalton protein)分子量为15.674kDa，在SDS-PAGE中显现的分子量大小通常为17kDa，因此，被命名为Skp。Skp也是一种分子伴侣，可以协助外膜蛋白早期折叠中间体的产生及保持其可溶性，蛋白中不包含组氨酸残基。另外，我们通过实验验证，SlyD和Skp没有脂蛋白脂肪酶的生物活性。

原核表达系统是体外获得大量蛋白，用以研究蛋白结构、功能以及应用于治疗、生产等的首要选择，其中大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚、成本低廉、生产率高、操作简单等优点，是常见的原核表达系统。但是大肠杆菌原核表达系统具有以下几个方面的不足：1、由于存在密码子的喜好，很多真核基因在大肠杆菌中不表达；2、大部分外源蛋白以包涵体形式表达；3、表达蛋白纯化难获得。因此，针对以上不足之处，常常采用以下办法：选取合适的表达载体、表达条件优化、密码子优化、融合标签及分子伴侣共表达等方法均能够提高外源蛋白的可溶性。

脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase，LPL)是一种由脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞以及乳腺细胞等实质细胞合成和分泌的一种糖蛋白，属于酯酶家族。LPL主要催化乳糜微粒和极低密度脂蛋白的甘油三酯水解，产生供组织利用的脂肪酸和单酰甘油。LPL能分解卵磷脂、磷脂酰乙醇胺，并促使脂蛋白之间转移胆固醇、磷脂及载脂蛋白，在机体脂质代谢调控上起关键作用。鲤LPL包含3个同源蛋白，LPL1、LPL2、LPL3，分子量分别为56.51kDa、54.85kDa和59.49kDa。为促进鲤脂肪代谢的机制的理论基础研究，对鲤LPL进行体外重组蛋白原核表达及纯化非常必要。但是实际操作中，面临表达效率低、可溶性差、纯化效率低的问题。

故本发明在生物工程技术领域有着广泛的应用前景。

发明人：冯文荣 唐永凯 王钰婧 俞菊华 于凡 李建林 苏胜彦 宋长友 李红霞

中国水产科学研究院淡水渔业研究中心系农业农村部（原农业部）所属综合性淡水渔业研究机构。前身为“太湖水产增殖科学实验基地”、“亚太地区综合养鱼研究和培训中心”，1978年建立于无锡。因单位撤并及隶属关系，先后有“国家水产总局长江水产研究所”、“中国水产科学研究院长江水产研究所”等多个称谓，1984年改为现称。“八五”以来一直位列“全国农业科研综合实力百强研究所”。2002年11月，被国家科技部、财政部和中编办确定为非营利性科研机构，进入国家科技创新体系。

(1)SlyD和Skp没有脂蛋白脂肪酶的生物活性，添加融合标签Skp和SlyD的蛋白表达载体可以提高目标蛋白的表达量和可溶性。

(2)添加融合标签SlyD的蛋白表达载体能起到促进蛋白分离纯化的作用。

(3)切除原质粒载体上的Nus-tag、S-tag和HSV-tag等，使融合蛋白无冗余氨基酸序列，利于后续研究。

(4)获得大量具有活性的鲤LPL1重组蛋白，为其功能研究提供了基础。

(5)对包涵体蛋白的复性发现含有融合标签Skp和SlyD可以促进目标蛋白的正确折叠和复性。

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