本发明公开了一株产苹果酸的米曲霉菌株的筛选及其应用,属于微生物技术领域。使用ARTP、60Coγ、NTG迭代复合诱变的方式,筛选得到了一株苹果酸高产菌株,命名为FMME S 38。在摇瓶优化条件下,苹果酸产量可达到140g/L及以上,在30L发酵罐苹果酸产量可达到191.5g/L,且具备良好的遗传稳定性,适用于工业化生产。

为进一步提高苹果酸的产量，本申请通过ARTP、NTG、60Coγ射线迭代复合诱变，筛选获得一株高苹果酸的米曲霉，并将其应用于苹果酸的发酵中，以使得苹果酸的产量得到更大的提高。

本发明提供了一株米曲霉(Aspergillusoryzae)，为菌株FMME-S-38，已于2020年7月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020294，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。

本发明提供了一种微生物菌剂，所述菌剂中含有所述菌株FMME-S-38。

在本发明的一种实施方式中，将菌株FMME-S-38接种于PDA平板中，28～35℃下培养65～75h，待菌株FMME-S-38的孢子浓度达到107cfu/mL以上时加入缓冲液(生理盐水或pH值为7的0.2M磷酸盐缓冲液)冲洗米曲霉孢子得到孢子悬液，在无菌环境下加入保护剂，得到微生物菌剂。

在本发明的一种实施方式中，所述保护剂为15g/100mL的葡萄糖溶液。

本发明提供了一种生产苹果酸的方法，以所述菌株FMME-S-38为发酵菌株，或添加所述微生物菌剂。

在本发明的一种实施方式中，所述菌株FMME-S-38在单位体积mL或单位质量g的发酵体系中孢子个数处于105～107数量级。

在本发明的一种实施方式中，发酵体系中的氮源可以为胰蛋白胨，所述胰蛋白胨的初始浓度为6～6.5g/L。

在本发明的一种实施方式中，在发酵第18～24小时补加氮源。

在本发明的一种实施方式中，补加的氮源为胰蛋白胨，所述胰蛋白胨在体系中的浓度为2～3g/L。

苹果酸(malate)，分子式为C4H6O5，又名2-羟基丁二酸，其粉末呈白色结晶状，苹果酸是一种非常重要的四碳平台化合物，与琥珀酸、富马酸一起被美国能源部列为四碳1,4-二羧酸组中最有潜力的生物基大宗化学品。由于苹果酸分子结构式中有一个手性碳原子，所以在自然界中存在三种形式：D型、L型、DL型，其中L-苹果酸是TCA循环中的中间产物，在细胞质中的NADH通过苹果酸-天冬氨酸途径穿梭进入线粒体的过程中起到十分关键的作用。苹果酸具有令人愉悦的香味，在食品工业中主要用作酸味剂，据报道，世界上每年的苹果酸需求量超过了20万吨。使用化学法合成DL-苹果酸的技术从六十年代被发明以来一直沿用至今。生物法生产L-苹果酸拥有低污染、低能耗、低成本与可持续发展等优点，已经发展成为合成L-苹果酸的主流方法，其中包括酶催化法和微生物发酵法。酶催化法已经应用于L-苹果酸的工业生产，而微生物发酵法生产苹果酸的水平需得到进一步提高。

江南大学（Jiangnan University），坐落于无锡市，是中华人民共和国教育部直属高校，国家“双一流”建设高校， “211工程”、“985工程优势学科创新平台”重点建设高校，入选国家“111计划”、卓越农林人才教育培养计划、卓越工程师教育培养计划、国家建设高水平大学公派研究生项目、国家大学生创新性实验计划、国家级大学生创新创业训练计划、国家级新工科研究与实践项目，是高水平行业特色大学优质资源共享联盟成员、“一带一路”高校食品教育科技联盟成员、中国政府奖学金来华留学生接收院校、国家大学生文化素质教育基地、首批高等学校科技成果转化和技术转移基地。

本发明以Aspergillus oryzaeNRRL3488为出发菌株，通过ARTP、NTG、60Coγ射线迭代复合诱变，筛选获得一株高苹果酸的米曲霉，命名为FMME-S-38。在摇瓶优化条件下，苹果酸产量可达到140g/L及以上，在30L发酵罐苹果酸产量可达到191.5g/L，且具备良好的遗传稳定性，适用于工业化生产。

生物材料保藏

本发明所提供的菌株FMME-S-38，分类命名为Aspergillus oryzaeFMME-S-38，已于2020年7月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020294，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。

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