一株分泌霜霉威单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用,属于食品安全免疫检测领域。本发明的分泌霜霉威单克隆抗体的杂交瘤细胞株ABC07,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.19180。所述杂交瘤细胞株ABC07分泌产生对霜霉威具有较好亲和力和较高灵敏度的单克隆抗体,对霜霉威的50%抑制浓度IC50为3.24 ng/mL,可用于制备霜霉威的免疫检测试剂盒以及胶体金试纸条,为食品中霜霉威的检测提供有力的检测方法及手段。

小鼠的免疫：选取6～8周龄的BALB/c小鼠进行免疫。将免疫原与福氏佐剂乳化完全后，通过皮下多点注射免疫小鼠，首次免疫采用福氏完全佐剂，剂量为100μL/只，加强免疫使用福氏不完全佐剂，剂量为50μL/只，冲刺免疫时免疫剂量为前一次免疫剂量的一半，剂量为25μL/只，与生理盐水混合均匀后直接进行腹腔注射；各次免疫间隔为三周。第三次免疫后，间隔一周采血检测血清效价和抑制；

细胞融合与细胞株建立：通过聚乙二醇（PEG 4000）法，使小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，通过HAT培养基培养，利用间接ELISA检测阳性细胞孔，并进一步利用间接竞争ELISA法测定阳性细胞孔的抑制效果，通过有限稀释法对有最好抑制的阳性细胞孔进行三次亚克隆，最终筛选获得杂交瘤细胞株ABC07；

杂交瘤细胞株性质的鉴定：采用小鼠单抗IgG类/亚类鉴定用酶标二抗套装测定；IC50值、交叉反应率和亲和力的测定通过ELISA法。

霜霉威是一种高效、广谱、安全的氨基甲酸酯类杀菌剂，属于内吸性杀菌剂，适用于叶面处理和土壤处理、种子处理。对藻状菌的真菌有效。例如，丝囊霉、盘梗霉、霜霉、疫霉、假霜霉、腐霉等真菌所致病害均有防治作用，对植物有刺激生长作用。对防治农作物，特别是蔬菜、果树的霜霉病、疫病、晚疫病、猝倒病、黑痉病有良好的效果。

有关霜霉威药物残留在动物组织中的检测方法，国内外已有少量报道，主要是用高效液相色谱～荧光检测器检测法及液相色谱一串联质谱法。提取的方法也各有不同，有液—液萃取、液—固萃取等。仪器检测方法可进行定量分析并具有较低的检测限，但是通常需要昂贵的仪器和复杂的操作，前处理及检测时间长，严重制约了这些检测方法的推广。而免疫分析方法具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员相对要求低等特点，因此适用于大量样品的快速筛查。本发明的目的在于提供一种对霜霉威具有较高亲和力和检测灵敏度的单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备方法。为间接竞争 ELISA 试剂盒以及胶体金试纸条的研发推广奠定了基础。

江南大学是教育部直属、国家“211工程”重点建设高校和“双一流”建设高校。学校具有悠久的办学历史、厚重的文化积淀，源起1902年创建的三江师范学堂，历经国立中央大学、南京大学等发展时期；1958年南京工学院食品工业系整建制东迁无锡独立建校，成立无锡轻工业学院；1962年无锡纺织工学院并入无锡轻工业学院；1995年更名为无锡轻工大学；2001年无锡轻工大学、江南学院、无锡教育学院合并组建江南大学；2003年东华大学无锡校区并入江南大学。

本发明的有益效果：（1）本发明获得的霜霉威单克隆抗体，对霜霉威有较好的检测灵敏度和亲和力；（2）一种新的合成霜霉威半抗原和免疫原的方法，合成步骤更加简化，有效，为今后人们的研究提供了合成免疫原的思路与方法。

科技成果只有通过实施开发应用，使其转化为生产力，才能取得经济效益和社会效益。成果方目标是将科技成果转化为现实生产力，期待有意愿的企业或合作单位进行合作推广或者进行产品生产。考虑合作转化、许可+合作等转化方式与企业、科学技术研究开发机构和其他组织建立合作关系。