一种检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法
成果类型:: 实用新型专利
发布时间: 2022-06-23 17:22:02
本发明公开了一种检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其中:包括大豆伴球蛋白致敏性肽段检测和大豆伴球蛋白致敏性消除。本发明提出大豆伴球蛋白的过敏性与其经消化后产生的一种抗酶解肽段的存在有密切关系,并在此基础上,提供一种经碱性蛋白酶低限度水解改性大豆伴球蛋白的方法,该方法下制备的大豆伴球蛋白既具有良好的加工功能性质,同时经体外模拟消化后该抗酶解肽段消除,经免疫印迹实验未检测到致敏性。本发明为低致敏性大豆蛋白开发提供方法和依据⊙
鉴于上述和/或现有大豆蛋白除致敏源中存在的问题,提出了本发明。
因此,本发明其中一个目的是,克服现有制备低致敏性大豆蛋白产品的不足,提供一种检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,本发明提供了如下技术方案:一种检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其特征在于:包括大豆伴球蛋白致敏性肽段检测和大豆伴球蛋白致敏性消除。
作为本发明所述检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法的一种优选方案,其中:根据权利要求1所述的检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其中:检测方法包括加热、消化酶水解、致敏性检测三个步骤,消除方法包括低限度水解、消化酶连续水解、致敏性测定三个步骤。
作为本发明所述检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法的一种优选方案,其中:根据权利要求1所述的检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其中:包括检测和消除,检测包括如下步骤:
加热:对大豆伴球蛋白溶液进行加热;
水解1:加入胃蛋白酶、胰蛋白酶进行酶水解;
致敏性检测:进行SDS-PAGE和ELISA分析;
消除包括如下步骤:
低限度水解:大豆伴球蛋白溶液中加入碱性蛋白酶进行酶水解得到酶解液;
水解2:对低限度酶解液进行消化酶连续水解处理;
致敏性测定:进行SDS-PAGE、ELISA分析、Western Blot分析。
作为本发明所述检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法的一种优选方案,其中:根据权利要求1所述的检测大豆伴球蛋白致敏性肽段及消除大豆伴球蛋白致敏性方法,其中:加热中,对大豆伴球蛋白进行加热处理的方法为将大豆伴球蛋白与去离子水混合,配制3%~7%(w/w)的大豆伴球蛋白溶液,于70~100℃加热5~40min,加热完毕后置于冰水浴中迅速冷却,4℃保存。
大豆营养价值高,蛋白质含量丰富。许多食品包括烘焙、谷物、肉类产品,素食食品以及低过敏性婴儿配方奶粉等,都含有大豆蛋白,可提供特定的营养和功能特性如乳化性、凝胶性、持水性、持油性等。但含有大豆的食品易引起过敏反应,包括荨麻疹、胃肠道发炎、呼吸不顺畅甚至死亡。迄今为止,大豆过敏尚无特效疗法,严格避免食用含大豆的食物是过敏患者的最佳选择,但完全避免食用大豆很困难。近些年来,国内外对大豆致敏性及消化性研究的重视度越来越高,这不仅可帮助过敏患者人群解决自身安全问题,也可促进饲养动物(猪、牛、马等)胃肠道得到更好地消化吸收。
食物过敏原的抗原表位包括线性表位(连续性表位)和构象表位(不连续性表位)。降低或消除食物过敏原的本质是破坏其抗原表位,作用过程可分为以下两个方面:第一,可通过破坏过敏原蛋白的高级结构或断裂化学键,使其失去原有构象表位,从而降低其致敏性。第二,可通过断裂过敏原蛋白一级结构中的肽键,降低过敏原相对分子质量,破坏其线性表位,从而降低甚至消除致敏性。当这两种作用过程中的某一种发生,过敏原的抗原表位被破坏,其免疫原性丧失,从而过敏原的致敏性也会受到影响(降低或消失)。目前,国内外常用的大豆脱敏方法主要包括物理法、生物学法、化学法和基因工程法等。
酶解法被认为是降低过敏蛋白致敏性的有效方法,酶水解能够通过断裂分子内的肽键,可将蛋白质分子水解成肽段,从而破坏过敏原蛋白的构象表位甚至线性表位。但酶水解在降低大豆蛋白致敏性的同时,往往伴随着其功能性质尤其是乳化性、凝胶性、起泡性等的减弱或丧失,而这大大限制了大豆蛋白在食品中的应用。热处理是食品加工中常用的工序之一,热加工对降低大豆致敏性有一定的效果,但经食用后仍有致敏性存在,消化道酶水解后肽段存在致敏性可能是重要原因。因此,降低水解物中残余抗酶解肽段的致敏性具有重大意义。
江南大学是教育部直属、国家“211工程”重点建设高校和“双一流”建设高校。学校具有悠久的办学历史、厚重的文化积淀,源起1902年创建的三江师范学堂,历经国立中央大学、南京大学等发展时期;1958年南京工学院食品工业系整建制东迁无锡独立建校,成立无锡轻工业学院;1962年无锡纺织工学院并入无锡轻工业学院;1995年更名为无锡轻工大学;2001年无锡轻工大学、江南学院、无锡教育学院合并组建江南大学;2003年东华大学无锡校区并入江南大学。
本发明提出大豆伴球蛋白的过敏性与其经消化后产生的一种抗酶解肽段的存在有密切关系,并在此基础上,提供一种经碱性蛋白酶低限度水解改性大豆伴球蛋白的方法,该方法下制备的大豆伴球蛋白既具有良好的加工功能性质,同时经体外模拟消化后该抗酶解肽段消除,经免疫印迹实验未检测到致敏性。本发明为低致敏性大豆蛋白开发提供方法和依据。
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