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一种胃液中miRNA的检测方法
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2022-06-20 11:31:09
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：浙江省温州市| 姚情秘 | 2022-11-23 15:16:23
本发明公开了一种胃液中miRNA的检测方法，包括胃液抽取和中和、RNA释放、氯仿提取、异丙醇沉淀、乙醇洗涤、RNA逆转录、PCR检测等步骤，该检测方法使用氢氧化钠溶液，对胃液中的粘稠成分进行液化使粘蛋白和多糖悬于溶液中，并中和胃液；加入胰蛋白酶进行消化，可以使粘蛋白等蛋白质水解，同时使胃液中的细胞成分变得松散，便于离心分离；加入Trizol溶液反复吹打，RNA充分释放并与多糖和粘蛋白等杂质分离，解决了胃液中酸度、多糖和粘蛋白等对RNA提取的干扰问题，因此本发明可以去除胃液中多糖和蛋白质等杂质干扰，对胃液中miRNA的有效提取，并对提取的miRNA进行荧光定量PCR检测。
该检测方法使用氢氧化钠溶液，对胃液中的粘稠成分进行液化使粘蛋白和多糖悬于溶液中，并中和胃液 ；加入胰蛋白酶进行消化，可以使粘蛋白等蛋白质水解，同时使胃液中的细胞成分变得松散，便于离心分离 ；加入Trizol溶液反复吹打，RNA充分释放并与多糖和粘蛋白等杂质分离，解决了胃液中酸度、多糖和粘蛋白等对RNA提取的干扰问题。
生物体中的RNA可以分为两大类 ：编码RNA和非编码RNA。非编码RNA又可分为长链非编码RNA和短链非编码RNA；后者较为重要的包括微小RNA，它的长度为19~24个核苷酸。在生物体的正常发育中miRNA起着举足轻重的作用，它们通过对目标mRNA的切割或翻译的抑制而发挥重要的基因表达负性调节作用，具有影响细胞的生长、分化和凋亡等重要功能。在不同组织细胞的生理异常变异中，某些miRNA具有明显的异常表达。
肖丙秀，女，学士，副高职称。曾在美国明尼苏达大学Hormel研究所癌生物学实验室进修学习。目前从事肿瘤学、分子生物学教学与研究工作。曾参与完成国家自然科学基金课题3项。主持完成浙江省自然科学基金项目和浙江省科技厅科研项目各1 项，在肿瘤相关非编码rna研究方面具有较丰富的经验，形成了胃癌诊治研究特色。近年来发表论文30多篇，其中SCI收录20多篇，与崔龙、郭俊明、宋皓军等人共同研发。
本发明提供一种胃液中miRNA的检测方法，该检测方法能去除胃液中多糖和蛋白质等杂质干扰，对胃液中miRNA的有效提取，并对提取的miRNA进行荧光定量RT-PCR检测。
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