科创中国
一种胃液中lncRNA的提取与检测方法
成果类型：: 发明专利
发布时间: 2022-06-20 11:28:10
科技成果产业化落地方案
方案提交机构：浙江省温州市| 姚情秘 | 2022-11-23 15:37:57
本发明公开了一种胃液中lncRNA的提取与检测方法，包括胃液抽取、胃液预处理、三氯甲烷提取、异丙醇沉淀、乙醇洗涤、干燥RNA、RNA逆转录、PCR检测等步骤，与现有技术相比，本发明的优点在于：通过对胃液预处理、氯仿提取、异丙醇沉淀、乙醇洗涤、RNA逆转录和PCR检测步骤，去除了胃液中多糖、粘蛋白等杂质，在简化实验操作步骤的基础上实现了对胃液中lncRNA高质量、高产率的提取，实现了对目标lncRNA荧光定量RT‑PCR检测，通过对130例胃液样本GAPDH的Ct值分析，发现了GAPDH是胃液中一个良好的外参基因，在此基础上又提出了用于判断胃液总RNA质量的GAPDH参考Ct值范围，对进一步研究胃液中lncRNA的出现规律及其与生理状态和疾病发生的关系具有重要的意义。
通过对胃液预处理、氯仿提取、异丙醇沉淀、乙醇洗涤、RNA逆转录和PCR检测步骤，去除了胃液中多糖、粘蛋白等杂质，在简化实验操作步骤的基础上实现了对胃液中lncRNA高质量、高产率的提取，实现了对目标lncRNA荧光定量PCR检测。
人体中编码蛋白质的基因大约有2～3万个，仅占人类基因组的2%，其余98%不编码蛋白质的基因组DNA最初被认为是没有功能的，是生物体中的垃圾，通常被称为“垃圾DNA”但目前的研究表明，这些垃圾DNA大多可转录产生非编码RNA随着高通量全基因组测序技术的普遍应用，人们惊奇地发现哺乳动物细胞中约98%的转录物为ncRNA。对于ncRNA结构特征和生物学功能的研究，离不开各类体液ncRNA的提取、RNA质量鉴定及其检测。
郭俊明教授主要从事肿瘤分子生物学、基因诊断与基因治疗等方面的研究。近年来，主持完成和在研国家和省部级科研课题5项，如国家自然科学基金项目“中国畲族人群DNA多态性研究“、“胃癌相关piRNA的鉴定及其诊断价值分析” ；浙江省自然科学基金项目“胃癌组织中Hiwi相互作用RNA的鉴定及其功能分析”；浙江省科技攻关项目“新型胃癌标志物的筛选与胃癌诊断试剂的研制” 等，与邵永富、肖丙秀等人共同研发。
本发明提供一种胃液中lncRNA的提取与检测方法，该方法能去除胃液中多糖和粘蛋白等杂质的干扰，实现了胃液中lncRNA高质量、高含量提取，并对提取的lncRNA进行荧光定量RT-PCR检测。
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