一种快速测定磺胺类抗生素残留的仿生酶联免疫检测方法
成果类型:: 发明专利
发布时间: 2022-05-16 13:12:54
本发明公开了一种快速测定磺胺类抗生素残留的仿生酶联免疫检测方法,特点是包括以下步骤:(1)将环己烷和Triton X-100加入两口烧瓶中,磁力搅拌后依次加入量子点、正硅酸乙酯和氨水,磁力搅拌后加入模板分子溶液以及功能单体,室温下聚合反应后除去磺胺类抗生素,再分散于乙醇磷酸盐溶液中,得到分子印迹-量子点纳米结构人工抗体溶液;(2)在每个酶标孔中依次加入分子印迹-量子点纳米结构人工抗体溶液和样品提取液;将酶标板室温育10 min,然后用酶标仪读出发射波长在605nm下的数值,根据荧光值由标准曲线计算出样品提取液中磺胺类抗生素含量,优点是特异性强、灵敏度高、合成简单、稳定性好和检测时间短。
本发明所要解决的技术问题是提供一种特异性强、灵敏度高、合成简单、稳定性好和检测时间短的快速测定磺胺类抗生素残留的仿生酶联免疫检测方法。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种快速测定磺胺类抗生素残留的仿生酶联免疫检测方法,包括以下步骤:(1)分子印迹-量子点纳米结构人工抗体的制备(2)待测样品检测。
由于养殖规模、养殖密度和养殖环境等的恶化,养殖过程中病害频发,对水产养殖业发展造成严重危害。磺胺类抗生素(Sulfonamides,SAs)是一类广谱抗菌药,主要用于预防和治疗细菌感染性疾病,或者作为饲料添加剂在动物生产中长期应用。但是,不合理使用易造成耐药性增加,在食品中残留的药物对人类健康造成潜在的危害,如诱发癌症等。因此,其在环境及食品中的残留问题引起了国内外的高度重视。因此,为保护食品安全和人类健康,必须加强对磺胺类抗生素的检测,尤其是快速检测技术。目前,磺胺类抗生素残留的检测方法主要有微生物学法、仪器分析方法和免疫法等。其中,微生物学方法虽然具有简单、费用低等特点,但是存在操作费时、敏感性和特异性都较差等问题,不能满足现在残留检测的需要。仪器分析方法主要有气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)及液质联用(LC-MS)等,这些方法具有准确、特异性好、可同时测定多种药物等优点,但是通常需要复杂、昂贵的仪器设备、操作复杂,限制了其广泛应用,且不适合现场大规模筛选检测。常规酶联免疫(Enzyme-linked Immunosorbent Assay , ELISA)方法,具有灵敏度高、特异性高、操作简便、适用于大批量样品检测等优点,受到了高度重视,但是现有的酶联免疫主要是基于生物抗体和显色反应,其中,生物抗体具有制备繁琐、周期长、稳定性差以及显色反应灵敏度低等缺点。
史西志,山东淄博人。2001年于青岛农业大学获学士学位,2004年于上海海洋大学获硕士学位,2008年于上海交通大学获博士学位。2008年3月至今,宁波大学海洋学院工作。2015.6-2016.6,加州大学戴维斯分校,访问学者。目前主要从事近岸海域环境和水产品中有机污染物检测及生物修复技术研究。近年来,作为项目负责人主持国家自然科学基金面上项目/青年项目、海洋公益性行业科研专项(子任务负责人)、科技部星火计划面上项目等项目10余项,以第一或通讯作者在Biomaterials(IF=8.387)、BiosensorsandBioelectronics(IF=7.476)、AnalyticalChemistry(IF=5.886)等期刊上发表高水平研究论文20余篇,获授权发明专利10项。获奖与荣誉称号1.2015年度浙江省科学技术奖二等奖,排名1。2.2015年度海洋科学技术奖二等奖,排名1。3.2014年宁波市科学技术奖三等奖,排名1。4.2012年度浙江省自然科学学术奖二等奖,排名1。5.第十三届宁波市青年科技奖6.浙江省151第三层次培养人员(2011年)7.浙江省高等学校中青年学科带头人(2013年)8.宁波市领军和拔尖人才培养工程第二层次(2015年)承担主要课题1.浙江省杰出青年科学基金项目,基于分子印迹荧光材料的养殖环境中典型内分泌干扰物响应及消除机理研究,2016/01-2019/12,38万元,在研,主持3-5个2.国家自然科学基金面上项目,31372572,近海养殖生物中赤潮毒素分子印迹-量子点荧光体系响应机理及应用研究,2014/01-2017/12,75万元,在研,主持3.海洋公益性行业科研专项经费项目,海岛多元集成供水技术研究及应用示范-子任务海岛水质监测及污水处理技术研究,2014/01-2017/12,76万元,在研,子任务负责人4.海洋公益性行业科研专项经费项目,我国近岸海域生物毒素监控技术集成与业务化应用示范,2013/01-2016/12,49万元,在研,协作单位负责人。
本发明获得的磺胺类抗生素分子印迹-量子点纳米结构人工抗体具有较高的选择性和荧光响应性能,可以代替生物抗体和显色剂应用于酶联免疫技术。同时该人工抗体由表面接枝反应制备,具有较高的稳定性和较好的荧光性能,克服了传统生物抗体制备周期长、易失活和常规显色剂灵敏度低等缺点。本发明制备的分子印迹-量子点纳米结构人工抗体,具有较好的荧光响应性能,将对分析物的特异识别和信号响应相结合,灵敏度高,同时,成本大大降低,且显著降低了分析所需时间,仅需约0 .5 h(常规酶联免疫时间为1-2 h),适用于快速检测磺胺类抗生素残留。本发明将获得的磺胺类抗生素分子印迹-量子点纳米结构人工抗体与酶联免疫技术联用,建立对磺胺类抗生素具有高灵敏度的仿生酶联免疫检测方法。该方法对水产品中磺胺类抗生素的最低检测限为0 .004 μg/kg,能够满足检测需要。
进行技术合作,遣派学者专家到国外或者其他地区的高校,研究机构或者生产企业与对方的学者,专家合作进行研究设计,或者双方学者,专家轮流到对方学校,研究机构或者企业进行研究。