您所在的位置: 成果库 缢蛏溶菌酶基因、编码蛋白及重组缢蛏溶菌酶基因工程菌的构建方法和应用

缢蛏溶菌酶基因、编码蛋白及重组缢蛏溶菌酶基因工程菌的构建方法和应用

成果类型:: 发明专利

发布时间: 2022-05-09 10:45:03

科技成果产业化落地方案
方案提交机构:浙江省温州市| 张暄婧 | 2022-12-09 09:02:43

本发明公开了缢蛏溶菌酶基因、编码蛋白及重组缢蛏溶菌酶基因工程菌构建方法和应用,特点是缢蛏溶菌酶基因序列如SEQIDNO.1所示;缢蛏溶菌酶基因编码蛋白氨基酸序列如SEQIDNO.2所示;其重组缢蛏溶菌酶基因工程菌构建方法为用分别含有I位点和I位点的引物扩增缢蛏溶菌酶基因编码蛋白的成熟肽序列;将克隆得到的目的基因插入pET28a(+)载体,获得重组质粒pET28a(+)‑Lysozyme;对重组质粒pET28a(+)‑Lysozyme进行诱导表达,获得重组缢蛏溶菌酶基因工程菌,优点是其表达的重组缢蛏溶菌酶基因工程菌对哈维氏弧菌,副溶血弧菌,灿烂弧菌均具有明显的杀菌作用。

缢蛏(Sinonovacula constricta)作为我国四大养殖贝类之一,在水产养殖中占据了重要的经济地位。然而,随着沿海城市经济的发展,海洋污染日益加剧,导致养殖缢蛏病害问题时有发生,尤其是细菌性疾病引发的疾病严重制约了缢蛏的生存和生长。目前在缢蛏养殖中大多使用抗生素进行防治,但抗生素的大量使用导致了“超级细菌”的出现以及抗生素的残留引起的食品安全问题日益突出,人们迫切需要开发新型抗菌剂进行防治。溶菌酶作为一种天然杀菌蛋白,不会导致细菌耐药性问题、而且对人体无毒害作用。因此,构建缢蛏溶菌酶基因表达工程菌,进而产业化制备绿色疾病制剂应用于水产养殖迫在眉睫。发明内容[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种缢蛏溶菌酶基因、编码蛋白及重组缢蛏溶菌酶基因工程菌的构建方法和应用,其表达的重组缢蛏溶菌酶基因工程菌对哈维氏弧菌,副溶血弧菌,灿烂弧菌均具有明显的杀菌作用。

本发明属于分子生物学以及基因工程技术领域,尤其是涉及一种缢蛏溶菌酶基因、编码蛋白及重组缢蛏溶菌酶基因工程菌的构建方法和应用。 溶菌酶(Lysozyme,***)是一种具有水解粘多糖功能的碱性酶,它能催化细菌细胞壁中粘多糖N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键的水解,进而破坏细菌细胞壁肽聚糖支架、导致内容物逸出,从而引起细菌死亡。溶菌酶作为一种广谱抗菌效应分子,广泛存在于各种微生物、植物、无脊椎动物和脊椎动物中,并在生物机体的免疫防御系统中发挥重要作用。在无脊椎动物组织中分布最为广泛的抗菌蛋白即是溶菌酶,这对只有先天免疫的无脊椎动物而言,溶菌酶的抗菌效应更为重要。在无脊椎动物中,溶菌酶还具有消化酶的作用,其通过分解微生物来获得生长所需的部分碳源和氮源。随着研究的深入,研究者发现溶菌酶除抗菌活性外,还具有许多其它功能,包括抗病毒、抗炎、抗肿瘤活性,以及诱导调节机体其他免疫因子的合成与分泌、协同其它免疫因子进行免疫防御调节作用。

李成华,1978年9月生,博士,研究员,博士生导师,瑞典乌普萨拉大学(Uppsala University)博士后,中国海洋与湖沼学会棘皮动物分会理事,浙江省动物学会理事,兼副秘书长。先后获得中国水产学会首届青年科技奖(2016年);国家优秀青年科学基金(2015年),宁波市领军和拔尖人才工程第一层次(2015年),浙江省杰出青年科学基金(2014年),浙江省高等学校中青年学科带头人(2013年),浙江省151第三层次培养人员(2011年)等人才工程资助。先后主持国家自然科学基金4项、浙江省杰出青年科学基金和浙江省科技厅国际合作项目等科研项目。目前主要从事海洋生物分子免疫学、病害防治和分子设计育种等方面的研究工作,在刺参免疫相关miRNA发掘和功能研究 以及病原微生物治病机制领域取得重要进展。以第一作者或通讯作者在"Genetics "、“Sci Rep”、" J Hazard Mater "、“***”“Dev Comp Immunol”等期刊发表SCI论文60余篇,个人H指数21。指导研究生获得国家奖学金6人次(3年)。

为了研发该成果,团队成员投入了大量人力和物力,并且取得了一定收益,对于技术上存在的缺陷,团队成员会加以完善和修正,此发明对于提高人民生活水平,推动科技进步都有重要意义

技术合作,遣派学者专家到国外或者其他地区的高校,研究机构或者生产企业与对方的学者,专家合作进行研究设计,或者双方学者,专家轮流到对方学校,研究机构或者企业进行研究。