本发明公开了灿烂弧菌的PCR检测引物及其检测方法和应用，特点是针对灿烂弧菌基因的DNA序列设计PCR引物，设计的PCR引物序列为：VSFur RTF3：5’‑ACAACAACCAGATTGCCAACA‑3’；VSFurRTR3：5’‑GATAACTTCACCGCAGTCTAAACAT‑3’，其检测方法包括以下步骤：（1）海水、刺参表皮、刺参肌肉或刺参体腔液基质的制备；（2）25μL的PCR反应体系建立；（3）PCR反应，最后进行琼脂糖凝胶电泳进行结果分析，该PCR检测引物可用于海水、刺参表皮、刺参肌肉和刺参体腔液中的灿烂弧菌的检测，优点是检测速度快、灵敏度高。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明灿烂弧菌的PCR检测引物及其检测方法和应用，该对引物针对灿烂弧菌的fur基因DNA序列设计，因此用灿烂弧菌的DNA或菌液作为PCR反应的模板能够得到扩增的fur基因，因此在凝胶电泳分析后能够看到223 bp的DNA片段；而在本实验中测定的其它种细菌中含有的fur基因与灿烂弧菌的fur基因在碱基组成上差异较大，因此用其它种细菌的DNA或菌液作为PCR反应的模板不能够得到fur基因的部分序列，因此在凝胶电泳分析后就不能够看到223 bp的DNA片段。该PCR检测引物可检测海水、刺参表皮、刺参肌肉和刺参体腔液等多种不同环境和仿刺参生物体中的灿烂弧菌。具有操作简便、检测速度快速、检测结果易于观察、灵敏度高、可实现半定量检测及检测线低等优点。

灿烂弧菌的检测方法主要有免疫学检测和分子生物学检测等方法，这些方法均可为灿烂弧菌的快速定性诊断提供技术依据。选择合适的分子靶标，开发灵敏度高、特异性强的核酸标识序列应用于PCR方法中，以进行灿烂弧菌快速检测方法具有重要的现实意义。目前已用于检测灿烂弧菌的靶标分子包括16S- 23S核糖体RNA基因间隔区序列、gyrB基因和鞭毛相关基因FlgF等。根据灿烂弧菌的16S-23S核糖体RNA基因间隔区扩增的177 bp的地高辛标记的探针，进行斑点检测方法可检测6 .25 pg的灿烂弧菌DNA；利用gyrB基因作为靶基因，设计引物进行SYBR Green I 实时定量PCR可检测到20个拷贝的灿烂弧菌。铁吸收调控蛋白（Ferric uptake regulator，Fur）是革兰氏阴性菌中重要的核心调控因子之一，几乎所有的细菌中均含有该类调控蛋白。Fur在细菌体内的功能是根据细胞质中铁离子的有效浓度来调节体内的铁代谢。Fur蛋白是由17 kDa亚单位组成的二聚体，每个亚基可以结合一个Fe2+，当细胞质中Fe2+充足时，Fur蛋白和Fe2+结合，以复合物的形式结合到铁吸收调控基因的启动子区域阻遏与铁代谢相关基因的转录，而当Fe2+缺乏时，Fur蛋白便从启动子区域解离下来，启动菌体内与铁代谢相关基因的表达。目前，国内外还没有公开任何关于利用根据灿烂弧菌的fur基因的DNA序列设计特异的核酸标识序列用于普通PCR，进行灿烂弧菌检测的相关研究报道。 灿烂弧菌（Vibrio splendidus）广泛存在于海洋环境，属革兰氏阴性菌，杆状，可运动，有极生单鞭毛，分生物Ⅰ型和生物Ⅱ型，二者均有致病性，是海洋动物重要致病菌之一，可感染棘皮动物、双壳贝类和甲壳类等宿主，导致水产养殖病害的发生。因此，为了满足水产养殖过程中对该菌的快速诊断和早期预警控制的要求，该菌的灵敏快速检测具有重要的意义。

李成华，1978年9月生，博士，研究员，博士生导师，瑞典乌普萨拉大学（Uppsala University）博士后，中国海洋与湖沼学会棘皮动物分会理事,浙江省动物学会理事，兼副秘书长。先后获得中国水产学会首届青年科技奖（2016年）；国家优秀青年科学基金（2015年），宁波市领军和拔尖人才工程第一层次（2015年），浙江省杰出青年科学基金（2014年），浙江省高等学校中青年学科带头人（2013年），浙江省151第三层次培养人员（2011年）等人才工程资助。先后主持国家自然科学基金4项、浙江省杰出青年科学基金和浙江省科技厅国际合作项目等科研项目。目前主要从事海洋生物分子免疫学、病害防治和分子设计育种等方面的研究工作，在刺参免疫相关miRNA发掘和功能研究 以及病原微生物治病机制领域取得重要进展。以第一作者或通讯作者在"Genetics "、“Sci Rep”、" J Hazard Mater "、“***”“Dev Comp Immunol”等期刊发表SCI论文60余篇，个人H指数21。指导研究生获得国家奖学金6人次（3年）。

为了研发该成果，团队成员投入了大量人力和物力，并且取得了一定收益，对于技术上存在的缺陷，团队成员会加以完善和修正，此发明对于显著提高人民生活水平，提高我国经济发展实力与科技力量，推动科技进步提高都有极大且及其重要的意义。

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