缢蛏抗副溶血弧菌相关SNPs分子标记及其扩增引物和应用
成果类型:: 发明专利
发布时间: 2022-05-09 10:29:21
本发明公开了缢蛏抗副溶血弧菌相关的SNPs分子标记及其扩增引物和应用,特点是运用高通量测序技术和生物信息学分析手段筛选到24个位于ABC转运蛋白家族基因上的SNP位点对缢蛏抗副溶血弧菌感染具有显著相关性,通过引物设计和高分辨率熔解曲线分型技术可对其中的6个SNP位点进行分型,6个SNP标记优势等位基因,其SEQ ID NO:1‑SEQ ID NO:6所示,并公开了其扩增引物以及该分子标记在缢蛏抗副溶血弧菌亲本选育中的应用,优点是快速、准确、有效地利用SNP标记检测缢蛏抗病个体,为缢蛏抗病品系标记辅助选育工作提供了可靠的分子标记。
与现有技术相比,本发明的优点在于:本发明缢蛏抗副溶血弧菌相关SNPs分子标记及其扩增引物和应用,在缢蛏敏感群体和抗病群体中进行ABC转运蛋白家族基因的SNPs位点检测以及与抗病性状的关联分析,发现其SNPs与缢蛏抗病性状显著相关,这在缢蛏SNP标记开发中实属首次;另外选用的SNP标记是从保守性较高的mRNA中开发得到的,这些标记直接来自于表达基因,提高了筛选的效率;本发明通过HRM分型技术,既保证了检测结果的可靠性,也避免了测序分析周期长、花费高、操作复杂的劣势,并且通过HRM证实了标记分型效果;本发明能够快速获得抗副溶血弧菌能力强且稳定遗传的缢蛏个体,避免了抗病性状不易观测和定量的缺点,结合传统的选育技术,可加速抗病品系的选育进程;此外本发明操作简单,检测快速,成本低廉,便于广泛推广使用,对于缢蛏的良种选育具有重要意义。
缢蛏(Sinonovacula constricta)是一种广温广盐的滩涂贝类,是我国四大养殖贝类之一,在我国沿海自北向南均有分布,然而数代的繁育养殖导致近交衰退,缢蛏种质逐年下降,在养殖过程中面临着生长速度变缓、抗逆性不强、病害增多、产品质量下降等诸多问题,且呈现愈演愈烈的趋势。近年来,随着持续的集约化养殖,蛏病的发生日益频繁,大批死亡现象时有发生,对缢蛏的养殖产业造成了一定的破坏性影响。因此,进行缢蛏遗传改良,培育具有优质、高产、抗病等优良性状的新品种,已成为缢蛏养殖业亟待解决的问题。腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP‑binding cassette transporter,ABC转运蛋白)是一类广泛分布在原核和真核生物中并具有多种功能的膜蛋白超级家族,其主要功能是利用ATP水解产生的能量进行逆浓度梯度跨膜转运过程。ABC转运蛋白的底物类型涵盖有机、无机小分子和部分有机大分子化合物,在细胞解毒、脂质稳态、信号转导、病害防御以及抗原呈递等生理过程中都有参与。在双壳贝类的研究中发现,ABC转运戴白有助于组织渗透性选择并防御异物渗透,其介导的异生物质抗性机制已被证明是防止环境毒物的第一道防线。在病原感染过程中,ABC转运蛋白在双壳贝类鳃组织表面形成了组织‑环境的选择性屏障,参与机体的免疫反应,因此ABC转运蛋白相当于缢蛏抗病抗逆的第一道防线。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)是指由于单个核苷酸的变异而引起基因组水平上的DNA序列多态性,具有密度高、分布广、共显性和可稳定遗传等特点,是目前最具发展潜力的分子标记。随着测序和芯片技术的高速发展,SNP标记已被广泛应用于高密度遗传连锁图谱构建、数量性状精细定位以及全基因组关联分析等研究中。分子标记辅助育种正是利用分子标记与养殖品种的性状相关联,从而实现基因水平的选择育种,克服传统方法育种效率低且受人为因素影响大的缺点,大大提高选择的准确性和育种周期。
李成华,1978年9月生,博士,研究员,博士生导师,瑞典乌普萨拉大学(Uppsala University)博士后,中国海洋与湖沼学会棘皮动物分会理事,浙江省动物学会理事,兼副秘书长。先后获得中国水产学会首届青年科技奖(2016年);国家优秀青年科学基金(2015年),宁波市领军和拔尖人才工程第一层次(2015年),浙江省杰出青年科学基金(2014年),浙江省高等学校中青年学科带头人(2013年),浙江省151第三层次培养人员(2011年)等人才工程资助。先后主持国家自然科学基金4项、浙江省杰出青年科学基金和浙江省科技厅国际合作项目等科研项目。目前主要从事海洋生物分子免疫学、病害防治和分子设计育种等方面的研究工作,在刺参免疫相关miRNA发掘和功能研究 以及病原微生物治病机制领域取得重要进展。以第一作者或通讯作者在"Genetics "、“Sci Rep”、" J Hazard Mater "、“***”“Dev Comp Immunol”等期刊发表SCI论文60余篇,个人H指数21。指导研究生获得国家奖学金6人次(3年)。
为了研发该成果,团队成员投入了大量人力和物力,并且取得了一定收益,对于技术上存在的缺陷,团队成员会加以完善和修正,此发明对于显著提高人民生活水平,提高我国经济发展实力与科技力量,推动科技进步提高都有极大且及其重要的意义。
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