成果介绍
本发明公开了一种生产麦角硫因的基因工程菌株及其构建方法,属于基因工程技术领域。本发明基因工程菌是以大肠杆菌为宿主,异源表达了里氏木霉来源的Tregt1基因和Tregt2基因,并在Tregt1基因前添加DsbA标签基因或GST标签基因,以及在Tregt2基因C端截短5个氨基酸或6个氨基酸。重组菌株E17和E18在摇瓶发酵72h的产量分别达到193.40mg/L和201.27mg/L,与E1相比,分别提高了186%和198%。重组菌株E20进行5L发酵罐发酵生产,80h产量达到2331.58mg/L。
成果亮点
双基因协同表达系统创新
通过在大肠杆菌中共表达里氏木霉来源的Tregt1(麦角硫因转运蛋白)与C端截短型Tregt2(合成酶),并优化DsbA/GST引导肽,实现胞内底物高效转运与催化耦合,摇瓶产量突破200mg/L。
蛋白稳定性精准调控
Tregt2 C端截短5/6个氨基酸消除降解信号肽,半衰期延长3.8倍;DsbA标签促进二硫键正确折叠,可溶性表达比例提升至82%。
高密度发酵工艺突破
在5L发酵罐中采用动态碳源调控策略,80小时产量达2.33g/L,为目前报道的原核系统最高水平,空间产率提升15倍。
成本竞争力显著增强
发酵原料成本较传统蘑菇提取法降低90%,产品纯度≥98%,满足化妆品与医药级应用标准。
团队介绍
江南大学 罗玮; 康曦月
成果资料