科创中国
一种重组人骨形态发生蛋白在原核体系中的可溶性表达及纯化方法
发布时间: 2025-11-05
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
生物与新医药技术,医药生物技术,新剂型及制剂技术
成果介绍
本发明公开了一种重组人骨形态发生蛋白在原核体系中的可溶性表达及纯化方法，将重组人骨形态发生蛋白(rhBMP)的基因序列拼接在His‑Linker‑GB1基因序列的3’末端，插入在原核表达体系表达载体中，并转入到原核感受态细胞中，以可溶的形式在胞内高表达，最后表达后的His‑Linker‑GB1‑BMP融合蛋白无需进行包涵体复性，通过一步金属螯合层析(吸附‑洗脱模式)即可获得高纯度融合蛋白，由于GB1标签分子量小，几乎不会对rhBMP的空间结构、生物活性产生影响，避免了传统大肠杆菌体系表达rhBMP形成包涵体、以无结构、无活性的包涵体形式表达，避免下游进行rhBMP蛋白复性的工序，操作简便，适合规模化放大，具有周期短、纯度高、工艺稳定等特点。
成果亮点
创新融合标签策略
采用His-Linker-GB1三元件融合标签（总分子量仅8kDa），使rhBMP在原核系统中可溶性表达比例提升至85%，避免传统包涵体复性流程，活性回收率提高5.3倍。
一步层析高效纯化
利用GB1标签的亲水性增强蛋白可溶性，结合His标签实现金属螯合层析一步纯化（动态载量28mg/mL），纯度≥98%，工艺周期缩短70%。
生物活性显著提升
获得的融合蛋白通过酶切去除标签后，rhBMP空间结构正确，C2C12细胞碱性磷酸酶活性诱导效应达商品化BMP-2标准的102%，证实其完整生物功能。
规模化生产优势突出
在50L发酵规模下蛋白产量达1.8g/L，批次间纯度偏差＜2%，满足临床级蛋白药物生产质量要求。
团队介绍
江南大学 罗玮; 崔优明
成果资料
下载app