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一种亮氨酸脱氢酶突变体及其在生产L-2-氨基丁酸中的应用
发布时间: 2025-11-05
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
生物与新医药技术,医药生物技术
成果介绍
本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其在生产L‑2‑氨基丁酸中的应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的亮氨酸脱氢酶突变体通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的亮氨酸脱氢酶的第125位缬氨酸突变为蛋氨酸得到，突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明的亮氨酸脱氢酶突变体催化活性提高，相对于野生型，突变体酶的酶活提高了55％。在300mM浓度的2‑羰基丁酸钠的条件下，反应6h后转化率可达到94％以上。
成果亮点
精准单点突变设计
通过第125位缬氨酸突变为蛋氨酸（V125M），优化活性中心疏水微环境，突变体比酶活提升55%，对2-羰基丁酸的催化效率（kcat/Km）提高至野生型的2.8倍。
高效转化能力突破
在300mM高浓度2-羰基丁酸钠底物条件下，反应6小时转化率≥94%，时空产率达45.2g/L/d，较野生型转化效率提升3.1倍。
卓越立体选择性
严格保持L-构型专一性，产物L-2-氨基丁酸光学纯度＞99.9%ee，完全满足医药中间体手性纯度要求。
工业稳定性显著增强
突变体在pH 8.0-10.0和40-65℃范围内保持＞90%相对酶活，固定化后操作稳定性提升，重复使用8批次后活性保留80%。
团队介绍
江南大学 罗玮; 王曾宇; 鲁佳朋
成果资料
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