科创中国
一种紫斑牡丹花瓣基部色斑形成基因沉默方法
发布时间: 2024-12-30
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
农、林、牧、渔业
成果介绍
本发明公开了一种紫斑牡丹花瓣基部色斑形成基因沉默方法。本发明属于植物基因工程技术领域，具体提供了一种紫斑牡丹花瓣基部色斑形成基因沉默方法，在本方案中通过将目的基因构建至TRV2载体，重组载体转化农杆菌后，对包含目的基因的农杆菌扩大培养，离心后将菌体重悬，分别以真空抽滤花瓣盘和花苞注射菌液的方法侵染花瓣色斑或花苞。经过两种方法侵染过的紫斑牡丹花瓣色斑可以观察到明显的表型效果，经HPLC检测可发现花色苷含量的显著下降。对花苞注射菌液后的花瓣材料进行结构基因的实时荧光定量检测实时荧光定量，发现目的基因的表达被有效抑制。本发明为紫斑牡丹花瓣基部色斑形成相关基因的功能研究提供一种效果显著、高效快捷的侵染方法。
成果亮点
针对上述情况，为弥补上述现有缺陷，本发明提供了一种紫斑牡丹花瓣基部色斑形成基因沉默方法，通过本方案中提供的方法可以高效地使TRV病毒载体浸染发育中的紫斑牡丹花瓣色斑部位，并产生明显表型。
本发明提供如下的技术方案：本发明提出的一种紫斑牡丹花瓣基部色斑形成基因沉默方法，具体包括下述步骤：
1)将TRV1病毒载体、TRV2空载体和携带目的基因的TRV2重组载体分别转化农杆菌，对鉴定后的阳性农杆菌进行扩大培养，离心后用侵染缓冲液重悬，得混合菌液；
2)采用真空抽滤花瓣盘法或者花苞注射菌液法对紫斑牡丹花瓣或花苞进行侵染，并观察表型。
进一步地，步骤2)中采用真空抽滤花瓣盘法进行侵染的具体步骤为：
(1)用打孔器将花瓣色斑部位取下，置于混合菌液中；
(2)用真空泵抽真空至0.7atm，负压处理45min，辅助混合菌液侵染花瓣；
(3)真空抽滤侵染后的花瓣盘放入干净的培养皿中，喷施清水使花瓣盘保持湿润，置于阴凉处48h后观察表型，并保存样品用于HPLC检测花色苷含量变化。
团队介绍
西北农林科技大学地处中华农耕文明发祥地、国家级农业高新技术产业示范区——陕西杨凌，是教育部直属、国家“985工程”和“211工程”重点建设高校，首批入选国家“世界一流大学和一流学科”建设高校，2022年入选国家第二轮“双一流”建设高校，2个学科入选“双一流”建设学科。
成果资料
产业化落地方案
成果综合评价报告
评价单位：- (-) 评价时间：2025-03-06
刘斌
西北农林科技大学
教授
综合评价
可以高效地使TRV病毒载体浸染发育中的紫斑牡丹花瓣基部，并产生明显表型。本发明为病毒诱导基因沉默技术在紫斑牡丹花瓣基部色斑形成过程中花青苷相关基因的功能研究提供了两种快捷高效的验证方法。对研究紫斑牡丹花瓣色斑形成机理提供了新的思路。总体而言，该项技术思路方向很好，未来市场空间较大，有利于当前政策要求，转化成熟度高，值得支持推广。建议强化相应产品开发，加大产业链开发力度。
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