科创中国

生物与新医药技术

本发明公开了一种Tnnt2H2B mCherry报告细胞系的构建方法及应用,属于生物技术领域。本发明利用CRISPR Cas9基因组编辑技术在小鼠胚胎干细胞R1中定点整合,将荧光蛋白基因敲入到Tnnt2基因起始密码子上游,使其融合表达,通过荧光强度直接指示Tnnt2基因的表达水平。本发明的Tnnt2H2B mCherry报告细胞系可以实时观察和研究Tnnt2基因的表达情况,用于跟踪和可视化心肌细胞的发育过程,研究心脏发育的分子机制、心血管疾病的发病机制、药物筛选和治疗效果评估,为心脏病理生理学和药物研发提供了新的工具和方法。

本发明的目的是提供一种Tnnt2 H2B-mCherry报告细胞系的构建方法及应用，以解决上述现有技术存在的问题，所构建的Tnnt2 H2B-mCherry报告细胞系实现了实时观察和研究Tnnt2基因的表达情况，实时跟踪和可视化心肌细胞的发育过程。 为实现上述目的，本发明提供了如下方案： 本发明提供一种Tnnt2 H2B-mCherry报告细胞系的构建方法，包括将H2B-mCherry敲入到Tnnt2基因的5’端起始密码子的上游，筛选稳定表达荧光蛋白的Tnnt2 H2B-mCherry报告细胞系的步骤。 优选的是，所述构建方法包括以下步骤： 构建靶向Tnnt2基因的5’端起始密码子的sgRNA的表达载体，以及含有荧光蛋白表达元件的重组载体； 将所述sgRNA的表达载体和所述重组载体共转染干细胞，经培养、筛选，获取稳定表达荧光蛋白的Tnnt2 H2B-mCherry报告细胞系。

西北农林科技大学地处中华农耕文明发祥地、国家级农业高新技术产业示范区——陕西杨凌，是教育部直属、国家“985工程”和“211工程”重点建设高校，首批入选国家“世界一流大学和一流学科”建设高校，2022年入选国家第二轮“双一流”建设高校，2个学科入选“双一流”建设学科。

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