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生物与新医药技术

一种枯草芽孢杆菌基因文库的构建方法。它涉及一种一种微生物基因文库的构建方法。它利用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B29提供了一种枯草芽孢杆菌基因文库的构建方法。构建方法：一、提取枯草芽孢杆菌B29基因组DNA；二、提取pUC19质粒；三、基因组不完全酶切及不完全酶切产物回收；四、载体去磷酸化；五、连接和转化；六、文库扩增和保存。本发明利用枯草芽孢杆菌B29和pUC19质粒构建了枯草芽孢杆菌基因文库，可用于生物领域。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一类能够形成具有较强抗逆性芽孢的革兰氏阳性根际细菌，目前广泛应用于实际农业生产防治作物真菌病害。自1945年Johnson等报道枯草芽孢杆菌分泌抗菌物质以来，人们已从枯草芽孢杆菌的不同菌株中发现多种抗菌物质，包括抗生素及抗菌蛋白。这类次生代谢产物除了对病原真菌、细菌、病毒有抑制作用外，还对芽孢杆菌生物膜形成、诱导植株产生抗病性均有影响。Afima等发现枯草芽孢杆菌所产生的表面活性剂，具有很强的溶血活性，表现出抗病毒、抗肿瘤、抗支原体和一定程度的抗细菌活性。伊枯草菌素是芽孢杆菌代谢产生的一类具有抗真菌活性的两性化合物，属于环脂类化合物，能够强烈抑制真菌生长。TasA是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在芽孢的形成过程中产生的蛋白质，对革兰氏阳性细菌和阴性细菌均具有广谱抗菌活性。因此，建立枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的基因文库将是筛选功能基因的有效方法，是未来发展枯草芽孢杆菌生物农药，以及生物防治病害的基础和关键。

黑龙江省科学院微生物研究所始建于1959年9月9日，原名中国科学院林业土壤研究所生物分所，隶属于中国科学院东北分院，1971年1月下放到黑龙江省，1973年后隶属黑龙江省科学院。黑龙江省科学院微生物研究所是从事生物工程技术、微生物等方面的基础性研究与科技开发的综合性科研机构。在基因工程技术、生物质能源、食用菌菌种保藏与应用、废水微生物处理、生物肥料、生物农药、微生物保健品、固液综合配套发酵技术等领域形成了专业特色和技术优势。长期承担国家五年计划项目、"863" 计划项目、国家自然基金项目和各部委、省市科研项目，已取得400余项科技成果，其中国家、部委项目45项及省重点项目57项，成果达国际先进水平以上30余项。获国家科技进步奖6项、省部级科技进步奖37项，发表一级以上学术论文800余篇，申请专利60余项，出版专著10余部。其中“灵杆菌素”、“金葡菌素”、“复合氨基酸”、“微生物肥料系列产品”、“微生物农药系列产品”、“光合细菌系列产品”、“食用菌系列产品”等科研成果在生产中应用，取得了可观的经济效益和巨大的社会效益。