科创中国

生物与新医药技术

产色氨酸基因工程菌株的构建方法，涉及一种产色氨酸基因工程菌株的构建方法。是要解决目前色氨酸生产方法存在色氨酸产率低、成本高的问题。方法：以大肠杆菌JMl09基因组DNA为模板，进行PCR扩增，获得目的基因aroG和trpBA；构建pMD18-T-aroG；和pET-32a载体酶切后连接，获得连接产物X；构建pMD18-T-trpBA；和pET-30a载体酶切后连接，获得连接产物Y；将连接产物X转化感受态细胞，再将连接产物Y转入，阳性重组菌即为产色氨酸基因工程菌株。本发明构建的工程菌株可过量表达DAHP合成酶和色氨酸合成酶，减少由反应产物对色氨酸合成酶的反馈抑制，增加色氨酸产量。用于生产色氨酸。

本发明是要解决目前色氨酸生产方法存在色氨酸产率低、成本高的问题，提供产色氨酸基因工程菌株的构建方法。本研究根据色氨酸在大肠杆菌中的合成途径，构建工程菌株过量表达催化色氨酸合成的前体物质3-脱氧-D-阿拉伯-庚酮-7-磷酸(DAHP)的酶(aroG)和色氨酸合成酶(trpBA)，通过过量表达aroG和trpBA，增加色氨酸合成所需前体物质的产生，减少由反应产物对色氨酸合成酶的反馈抑制，从而增加色氨酸的产量，使这株色氨酸生产用工程菌株既能满足生产成本低的要求，又能大幅度提高色氨酸生产能力，为色氨酸的大规模工业化生产和进一步应用打下基础。

黑龙江省科学院微生物研究所始建于1959年9月9日，原名中国科学院林业土壤研究所生物分所，隶属于中国科学院东北分院，1971年1月下放到黑龙江省，1973年后隶属黑龙江省科学院。黑龙江省科学院微生物研究所是从事生物工程技术、微生物等方面的基础性研究与科技开发的综合性科研机构。在基因工程技术、生物质能源、食用菌菌种保藏与应用、废水微生物处理、生物肥料、生物农药、微生物保健品、固液综合配套发酵技术等领域形成了专业特色和技术优势。长期承担国家五年计划项目、"863" 计划项目、国家自然基金项目和各部委、省市科研项目，已取得400余项科技成果，其中国家、部委项目45项及省重点项目57项，成果达国际先进水平以上30余项。获国家科技进步奖6项、省部级科技进步奖37项，发表一级以上学术论文800余篇，申请专利60余项，出版专著10余部。其中“灵杆菌素”、“金葡菌素”、“复合氨基酸”、“微生物肥料系列产品”、“微生物农药系列产品”、“光合细菌系列产品”、“食用菌系列产品”等科研成果在生产中应用，取得了可观的经济效益和巨大的社会效益。