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一种从重组毕赤酵母中制备ELABELA多肽的方法
发布时间: 2023-10-13
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利,新技术
行业领域：
生物与新医药技术
成果介绍
本发明提供了一种从重组毕赤酵母中制备ELABELA多肽的方法，是在生物体内制备的纯天然状态多肽，无需化学合成法中采用的二甲基甲酰胺（DMF）和二氯甲烷等多种有毒有害试剂。
本发明的第一个目的是提供一种从重组毕赤酵母中制备ELABELA多肽的方法，合成一段编码ELABELA多肽的SEQ ID NO. 1所示DNA序列，并将这段DNA序列克隆到毕赤酵母表达载体pGAPHαA上，得到重组表达载体pGAPHαA-ELABELA；然后将构建好的重组表达载体pGAPHαA-ELABELA转化到毕赤酵母染色体中，构建出能够表达ELABELA多肽的重组毕赤酵母；利用重组毕赤酵母表达外源的ELABELA多肽，并将其分泌到酵母培养液上清中，将酵母培养液上清中的ELABELA多肽提取纯化，得到ELABELA多肽。
另外目前化学合成法尚不能够在蛋白质的氨基酸侧链上进行复杂的糖基化修饰，所合成多肽与生物体内制备的纯天然状态多肽有所区别。本发明在生物体内天然合成，可以对氨基酸侧链上进行复杂的糖基化修饰，是纯天然多肽。
成果亮点
本发明通过重组毕赤酵母的方法制备ELABELA多肽的效率较高，每升酵母培养液上清可以获得160mg的ELABELA多肽。所述从酵母发酵液上清中纯化ELABELA多肽的层析技术简易高效，普通蛋白质进行离子交换层析时，pH通选择中性及其附近，本发明选用pH较偏碱性的范围，在此特殊pH范围内，可以实现目的多肽的纯化，所述纯化方法未见公开报道。
现有技术通常化学合成法制备多肽的过程需要大量运用有毒有害的化学试剂，例如二甲基甲酰胺（DMF）和二氯甲烷，容易对环境和操作人员造成损害，后期无害化处理费用高昂。本发明通过基因重组方式制备多肽，整个过程环保不添加和产生有毒试剂，利于进一步工业化应用推广。
团队介绍
新乡医学院是河南省独立建制的西医本科院校。入选国家“111计划”， [1]是国家“十三五”中西部高校基础能力建设工程（二期）支持高校、教育部卓越医生教育培养计划建设高校。
学校占地面积***亩（含5所临床学院），建筑面积***万平方米（含5所临床学院），教学科研仪器设备总值近***亿元，图书馆馆藏各类图书***万册。 截至2021年9月，学校设有22个教学学院，开设一级学科硕士学位授权点12个，专业学位硕士授权点10个，有本科专业35个；有教职工13718人（含5所临床学院），各类在校生近***万人。
成果资料
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