科创中国
一种酵母表达载体的构建方法及其制备木聚糖酶的方法和应用
发布时间: 2023-07-10
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
农、林、牧、渔业
成果介绍
本发明公开了一种酵母表达载体的构建方法，包括以下步骤，以木聚糖酶基因片段构建pMD‑Xyn载体，利用限制性内切酶对pMD‑Xyn载体进行酶切，胶回收木聚糖酶基因片段，利用限制性内切酶酶切pPICZαA载体，将胶回收的木聚糖酶基因片段与酶切后的pPICZαA载体连接，导入大肠杆菌感受态细胞DH5α，转化构建pPICZαA‑Xyn载体。本发明基于香菇菌在发酵秸秆过程中能够产生木聚糖酶有效降解秸秆中木质纤维素的主要成分木聚糖，以其木聚糖酶基因构建了一种含木聚糖酶基因的酵母表达载体，以为木聚糖酶的商业化生产、秸秆类饲料的反刍动物利用方面提供理论基础和技术支撑。
成果亮点
1.一种酵母表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)采用PCR进行体外扩增获得香菇木聚糖酶基因片段，所述香菇木聚糖酶基因片段的序列为SEQ ID NO：l；
(2)以香菇木聚糖酶基因片段构建pMD‑Xyn载体；
(3)利用限制性内切酶对pMD‑Xyn载体进行酶切，胶回收木聚糖酶基因片段；
(4)利用限制性内切酶酶切pPICZαA载体；
(5)将步骤3中胶回收的木聚糖酶基因片段与步骤4中酶切后的pPICZαA载体连接，导入大肠杆菌感受态细胞DH5α，转化大肠杆菌构建pPICZαA‑Xyn载体，再利用质粒提取试剂盒从重组大肠杆菌中提取pPICZαA‑Xyn载体；
所述pPICZαA‑Xyn载体基因序列为SEQ ID NO：2；
步骤(2)中所述构建pMD‑Xyn载体的方法为：以木聚糖酶基因片段连接pMD 18‑T载体，转化大肠杆菌构建pMD‑Xyn载体，所述pMD 18‑T载体基因序列为SEQ ID NO：3。
团队介绍
江西农业大学位于江西省南昌市，是中华人民共和国农业农村部、中华人民共和国国家林业和草原局与江西省人民政府共建的全国重点大学，是国家中西部高校基础能力建设工程高校、江西省一流学科建设高校，入选国家首批卓越农林人才教育培养计划、国家“2011计划”、国家大学生文化素质教育基地、国家级大学生创新创业训练计划、江西省卓越工程师教育培养计划。
成果资料
产业化落地方案
成果综合评价报告
评价单位：- (-) 评价时间：2023-07-11
涂媛
保定市知识产权协会
部长
综合评价
本技术具有较强的财务盈利能力，其财务净现值良好，投资回收期合理。综上所述，该技术属于国家鼓励支持的项目，技术的经济和社会效益客观，技术的投产将改善优化当地产业结构，实现高质量发展的目标。
查看更多>
下载app