科创中国
一株皮特不动杆菌及其应用
发布时间: 2022-12-09
基本信息
合作方式：
技术转让
成果类型：
发明专利
行业领域：
生物与新医药技术
成果介绍
一株皮特不动杆菌及其应用，本发明涉及一株皮特不动杆菌及其应用。本发明的目的是为了提供一株降解2,2’,4,4’‑四溴联苯醚的皮特不动杆菌，本发明一株皮特不动杆菌为皮特不动杆菌(Acinetobacterpittii)GB‑2，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址是中国武汉市武汉大学，保藏日期是2021年1月19日，保藏编号为***。本发明筛选的菌株皮特不动杆菌GB‑2可用于被BDE‑47污染的水体和土壤的生物修复，具有较高的应用价值。本发明应用于环境微生物技术领域。
成果亮点
①将从电子垃圾拆解场地采集的土壤过筛，称取10g，放置于带有玻璃珠的锥形瓶中，加入以BDE-47为唯一碳源的菌株筛选培养基，于35℃，150rpm的振荡培养箱中培养，使细菌呈单细胞状态分散于液体中，与营养物质充分接触；
②从锥形瓶内的菌悬液中吸取10mL，转接至90mL新配置的BDE-47菌株筛选培养基中，在相同条件下进行传代培养，重复上述步骤，进行几个周期的培养；
③采用污染物浓度梯度驯化法进行菌株驯化：细菌驯化体系中BDE-47的浓度按10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L依次增加，7d为一个驯化周期，驯化共四个周期；
④再采用最大污染物浓度驯化法进行菌株驯化：细菌驯化体系BDE-47浓度为100μg/L，7d为一个驯化周期，驯化共四个周期，得到可以以BDE-47为唯一碳源的生长的菌群；
⑤吸取最后一个周期降解菌株筛选培养基中菌液1mL，按10倍稀释法将所取菌液稀释为10-1-10-6梯度的液体，取100μL液体涂布于LB固体培养基上，用灭菌涂布棒涂抹均匀，放于37℃的恒温培养箱中进行培养；
团队介绍
雷锋团队是由哈尔滨师范大学14级政治与行政学院的关明贺同学于2015年9月1日建立的学生自主创立的创业团队。在黑龙江福成科技有限公司的赞助下，旨在为江北的大学生服务，让大学生过上更好的大学生活。自创立以来，雷锋团队本着为同学服务的宗旨，解决大学生生活问题为核心，为大学生提供广大的创业机会。创立后不久已成为哈尔滨江北十余所大学院校人数最多、最有号召力和影响力的学生团队组织。
成果资料
产业化落地方案
成果综合评价报告
评价单位：“科创中国”黑龙江科技服务团 (黑龙江省科学技术协会) 评价时间：2023-11-11
评价单位：“科创中国”黑龙江科技服务团 (黑龙江省科学技术协会) 评价时间：2023-01-06
黄剑华
哈尔滨工业大学
教授
综合评价
在初筛的基础上进一步在35℃的条件下，以菌株是否具有较高BDE-47降解率为依据，复筛选出降解效能较好的菌株，命名为GB-2并进行菌株鉴定。在无菌操作的条件下，用无菌水对菌悬液进行稀释，取100μL菌液于LB固体培养基平板上，用灭菌的涂布棒涂布均匀，倒置于37℃的恒温培养箱中进行培养至单菌落长出，菌落形态为乳白色，圆形，表面光滑、湿润，无褶皱，边缘整齐，易挑起；细胞形态为短杆状；革兰氏染色阴性；其生理生化特征在于接触酶反应阳性、氧化酶反应阴性、柠檬酸利用阳性、淀粉水解阳性、甲基红试验反应阴性、硝酸盐还原反应阴性、伏普试验反应阴性、产吲哚试验阳性。对细菌DNA进行提取，将所得细菌基因组DNA用细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增，(27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)，电泳后割胶回收PCR产物，委托苏州金唯智生物科技有限公司进行16S rDNA测序，将测序结果用BLAST软件与Genbank中已登录的16S rDNA序列进行同源性比较，发现本实施方式筛选得到的菌株GB-2与皮特不动杆菌属(Acinetobacter pittii)同源性达100％，将序列提交GenBank数据库，获得登录号为MT150630。根据16S rDNA测序结果，利用NCBI提供的Blast工具和MEGA7.0等相关软件在GenBank数据库中找到了同源序列，并建立了系统发育树，菌株与皮特不动杆菌的同源性最高，达100％，最终命名为皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)GB-2。
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