本发明公开了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其应用,属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明提供了一种亮氨酸脱氢酶突变体,所述亮氨酸脱氢酶突变体与氨基酸序列如SEQ ID ***所示的亮氨酸脱氢酶相比,第72位氨基酸由赖氨酸突变为了丙氨酸,本发明首次对亮氨酸脱氢酶底物通道内碱性氨基酸残基进行定点突变,改造了酶可能底物结合位点附近的结构及环境,获得了更加高效制备L 2 氨基丁酸的亮氨酸脱氢酶。本发明提供的底物耐受性提高的亮氨酸脱氢酶突变体亮氨酸脱氢酶突变体K72A能耐受*** 2 酮丁酸且对于底物2 酮丁酸的催化活力提高了15%。