本发明属于化工领域,公开了一种分离二异丁烯和叔丁醇混合物的方法。该方法采用共沸精馏和液液萃取分离相结合的方法分离二异丁烯和叔丁醇,共沸精馏时选择甲醇作为共沸剂;萃取时以水作为萃取剂,从二异丁烯与甲醇共沸物中萃取出甲醇。该方法操作简单,分离效果好。本发明属于生物化工领域,特别涉及一种构建产富马酸大肠杆菌基因工程菌的方法。该构建方法主要包括失活或者敲除TCA循环中富马酸至苹果酸转化的关键酶富马酸酶,敲除抑制TCA循环的关键基因arcA。进一步地,还可以敲除丁二酸、乳酸、甲酸途径关键酶基因,实现厌氧条件下富马酸的积累。