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基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法
基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法
发布时间: 2022-05-16
基本信息
合作方式:
技术转让
成果类型:
发明专利
行业领域:
其他
成果介绍
1.一种基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法,其特征在于包括大金纳米粒子和小金纳米粒子的合成,其表面的引物修饰,金纳米粒子-引物偶联物的稳定,不同长度的链状可控组装,组装产物的手性性质表征; 具体步骤: (1)25nm金纳米粒子合成 采用柠檬酸三钠还原氯金酸合成25nm金纳米粒子; (2)10nm金纳米粒子合成 采用单宁酸还原氯金酸合成10nm金纳米粒子; (3)金纳米粒子和引物的偶联 将新合成的25nm金纳米粒子和巯基修饰的上游引物F-primer偶联,新合成的10nm金纳米粒子和巯基修饰的下游引物R-primer偶联,分别形成金纳米粒子-引物偶联物; F-primer:5’-SH-(CH2)6-TGGCTGACCCTGATGAGTTCG-3’,扩增长度为50bp; R-primer:5’-SH-(CH2)6-GGGCCATGATTACGCCAGTT-3’,扩增长度为50bp; (ⅰ)将步骤(1)中制备好的1mL2nM25nm金纳米粒子及步骤(2)中制备好的1mL10nM10nm金纳米粒子分别以7000rpm、13000rpm离心10min,弃上清,分别重悬在100μL的超纯水中,4℃保藏、待用; (ⅱ)25nm金纳米粒子和上游引物F-primer偶联:取(ⅰ)制备好的50μL25nm金纳米粒子加入50μL200nM的F-primer,混匀,室温反应12h; (ⅲ)10nm金纳米粒子和下游引物R-primer偶联:取(ⅰ)制备好的50μL10nm金纳米粒子加入50μL1μM的R-primer,混匀,室温反应12h; (ⅳ)将上述(ⅱ)和(ⅲ)步骤中反应溶液分别在7000rpm、13000rpm离心10min,弃上清,后用50μL的超纯水分散沉淀,4℃保藏、待用; (4)金纳米粒子-引物偶联物的稳定 将金纳米粒子-引物偶联物和巯基修饰的聚乙二醇PEG1000反应,以稳定金纳米粒子; (5)链状可控组装 以λDNA为模板,通过优化PCR扩增条件,将金纳米粒子-引物偶联物在PCR体系中进行不同循环数下的可控组装,离心浓缩,得组装产物; (6)组装产物的TEM和手性性质表征 组装产物进行TEM和CD表征。
2.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法,其特征在于不同粒径金纳米粒子合成: 25nm金纳米粒子合成:将***的超纯水加入到洁净的三角烧瓶中,搅拌条件下加入***的浓度为2g/L的氯金酸,加热搅拌,达沸腾,紧接着加入***%的柠檬酸三钠溶液,边加热边搅拌,溶液颜色从淡紫色变成红色,反应持续6-8min以使柠檬酸三钠完全沉降;溶液冷却至4℃保藏,即制得粒径为25nm的金纳米粒子; 10nm金纳米粒子合成:配制1mL1%的氯金酸于79mL的超纯水中,混合均匀即为A溶液;将4mL1%柠檬酸三钠溶液、***%的单宁酸溶液和***浓度为25mM的碳酸钾混于***的超纯水中,即为B溶液;将A和B溶液分别加热到60℃,在高速搅拌下把B溶液迅速加到A溶液中,反应液在60℃下继续搅拌反应,然后溶液加热回流2min,形成亮红色的溶液,最终冷却至室温合成粒径在10nm的金纳米粒子。
3.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法,其特征在于金纳米粒子-引物偶联物的稳定: 将步骤(3)所得的金纳米粒子-引物偶联物中加入2μL100μM的PEG1000,室温反应12h,反应后的溶液在8000rpm离心10min,弃上清,后用50μL的超纯水分散沉淀,4℃保藏、待用。
4.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法,其特征在于链状可控组装: (a)PCR:以λDNA为模板,采用制得的25nm金纳米粒子-F-Primer及10nm金纳米粒子-R-Primer进行PCR,PCR反应体系:dNTPs1μL,TaqDNA聚合酶***μL,λDNA模板质粒***μL,PCR反应缓冲液5μL,分别取25nm金纳米粒子-F-Primer4μL和10nm金纳米粒子-R-Primer4μL,加灭菌水至总体积为50μL; (b)扩增程序为:94℃预变性3min;94℃变性30s,60℃退火30s,72℃延伸1min,2~20个循环;72℃再延伸10min;10℃保存,得PCR可控组装产物。
5.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法,其特征在于组装产物的TEM和手性性质表征: 取500μLPCR产物进行8000rpm离心10min,弃上清,沉淀用100μL的超纯水分散,进行TEM和CD表征。
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