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一种使含有重组DNA的反式-4-羟脯氨酸生物合成系统活性增强的方法

发布时间: 2022-05-16

基本信息

合作方式： 技术转让
成果类型： 发明专利
行业领域：
其他
成果介绍
  • 1.一种使含有重组DNA的反式-4-羟脯氨酸生物合成系统活性增强的方法，其中，含有重组DNA的反式-4-羟脯氨酸生物合成系统是通过将具有脯氨酸4-羟化酶活性的蛋白质的基因片段重组到载体上并转入微生物细胞，得到的具有反式-4-羟脯氨酸生物合成活性的重组微生物，本发明还提供反式-4-羟脯氨酸的生产方法。
  • 2.权利要求1所述的使反式-4-羟脯氨酸生物合成系统活性增强的方法，其特征在于通过优化脯氨酸4-羟化酶基因的密码子，并使重组微生物中的经密码子优化后的脯氨酸4-羟化酶基因的拷贝数增加以及向重组微生物中导入透明颤菌血红蛋白基因来实现。
  • 3.权利要求2所述的重组微生物中的脯氨酸4-羟化酶基因的拷贝数增加是通过将经密码子优化后的脯氨酸4-羟化酶基因连接到多拷贝质粒中来实现的。
  • 4.权利要求2所述的透明颤菌血红蛋白基因来源于透明颤菌(Vitreoscilla sp.)。
  • 5.权利要求3所述的多拷贝质粒包括但不局限于pET28a、pKYP10等。
  • 6.反式-4-羟脯氨酸的生产方法，其特征是将权利要求1、2、3所述的重组微生物在培养基上培养，将得到的培养物、菌体或者它们的处理物作为酶源，在2-酮戊二酸和亚铁离子存在下，于水性介质中使L-脯氨酸转化为反式-4-羟脯氨酸，再从该水性介质中提取生成的反式-4-羟脯氨酸。
  • 7.权利要求6所述的生产方法，其特征是水性介质是培养液。
  • 8.权利要求6所述的生产方法，其特征在于向培养基中加入L-脯氨酸。
  • 9.权利要求6所述的生产方法，其中所述的重组微生物可利用培养基中的碳源生成2-酮戊二酸，并在培养基中积累2-酮戊二酸。
  • 10.权利要求1、2、3、6所述的重组微生物包括但不局限于大肠杆菌属、棒状杆菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌、酵母菌等。
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